Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-RhoGAP (p190-B) para WB, IP, ELISA - Q13017

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RhoGAP

• A proteína GTPase-ativadora 5 de Rho (ARHGAP5, também conhecida como p190-B, RhoGAP5) é um membro da família RhoGAP que atua como uma proteína GTPase-ativadora (GAP) para as pequenas GTPases da família Rho, aumentando sua atividade intrínseca de hidrólise de GTP para terminar a sinalização (PubMed:8537347). Referências relacionadas: PMID:8537347
• A proteína sofre splicing alternativo, gerando múltiplas isoformas que podem apresentar expressão tecido-específica e diversidade funcional.
• ARHGAP5 está localizada principalmente no citoplasma e pode se associar à membrana celular, o que é consistente com seu papel na regulação de Rho GTPases em sítios de sinalização próximos à membrana.
• A proteína é uma fosfoproteína, e sua atividade pode ser modulada por fosforilação de tirosina, ligando-a a vias de sinalização de fatores de crescimento e integrinas.
• Ela é detectada especificamente em fibroblastos da pele em nível proteico, sugerindo um papel na biologia dos fibroblastos e possivelmente na cicatrização de feridas ou remodelação do tecido conjuntivo.
• Palavras-chave do UniProt: Estrutura 3D, Splicing alternativo, Membrana celular, Citoplasma, Ativação de GTPase, Membrana, Nitração, Fosfoproteína, Identificação proteômica, Proteoma de referência, Repetição. Essas palavras destacam suas características estruturais e regulatórias.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 1150–1300 da RhoGAP humana (Q13017), uma região que pode ser bem conservada entre as espécies (apresenta reatividade cruzada com camundongo e rato). Valide a especificidade na espécie de interesse por alinhamento de sequência ou análise inicial de Western blotting.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto é de ~172 kDa. Utilize porcentagens de gel apropriadas (por exemplo, SDS-PAGE a 6–8%) e controles de carga. Confirme a especificidade da banda usando lisados de controle positivo (por exemplo, lisados de fibroblastos da pele, com base nos dados de expressão tecidual).
• Em experimentos de imunoprecipitação (IP), otimize a concentração do anticorpo por titulação e inclua controles de IgG apropriados. Considere a ligação cruzada do anticorpo às esferas para reduzir a interferência da cadeia pesada na detecção subsequente por WB.
• Para ELISA, pareie com um anticorpo de detecção compatível ou use como anticorpo de captura, dependendo do formato do ensaio. Valide com a proteína RhoGAP recombinante ou lisados celulares que expressam o alvo.
• Como o anticorpo é monoclonal (de coelho), é esperado um desempenho consistente entre lotes. No entanto, re-valide cada novo lote em sua aplicação e sistema de amostra específicos.

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