Anticorpo Policlonal Anti-RNF168 para WB, ELISA - Q8IYW5

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RNF168

• Ligase de ubiquitina-proteína E3 que catalisa a monoubiquitinação da histona nucleossómica H2A na Lis-13 e Lis-15 (H2AK13Ub e H2AK15Ub), desempenhando um papel central na resposta a danos no DNA.
• Atua com UBE2N/UBC13 a jusante da RNF8 para amplificar a ubiquitinação das histonas H2A e H2AX em quebras de cadeia dupla, promovendo a formação de cadeias de ubiquitina ligadas a 'Lis-63' e o recrutamento das proteínas de reparo TP53BP1 e BRCA1.
• Também recrutado para locais de ligação cruzada intercadeia de DNA (ICL), onde medeia a ubiquitinação ligada a 'Lis-63' das histonas H2A e H2AX, facilitando a montagem do complexo de anemia de Fanconi (FA) e o reparo.
• Após danos no DNA, colabora com a RNF8 para ubiquitinar e degradar a JMJD2A/KDM4A, desmascarando a marca H4K20me2 para promover o carregamento da TP53BP1 nos locais de dano.
• Envolvido na recombinação de mudança de classe no sistema imunológico, regulando as vias de reparo de quebras de cadeia dupla.
• Localiza-se no núcleo, onde é recrutado para lesões de DNA através da ligação a histonas H2A e H2AX previamente ubiquitinadas.
• Pertence à família de proteínas de dedo de zinco RING; contém um domínio RING N-terminal e motivos MIU C-terminal que medeiam a ligação à ubiquitina.
• Classificado como um regulador da cromatina e fator de reparo de DNA; palavras-chave biológicas importantes incluem ligação a metal, fosfoproteína, transferase e via de conjugação Ubl.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio corresponde aos aminoácidos 300–571 da RNF168 humana, uma região que abrange os motivos MIU C-terminal; este desenho pode favorecer a deteção da proteína de comprimento total a ~65kDa.
• Para Western blotting, considere testar extratos nucleares de linhas celulares humanas ou de rato, uma vez que a RNF168 se localiza no núcleo e a sua expressão pode ser induzida em condições de dano no DNA.
• O ELISA pode ser usado para rastrear sobrenadantes de hibridoma ou quantificar os níveis de RNF168; garanta que o imunogénio recombinante ou um péptido relevante seja usado como antigénio de revestimento.
• Como a RNF168 funciona na sinalização dependente de ubiquitina, inclua inibidores apropriados de protease e desubiquitinase durante a preparação da amostra para preservar espécies potencialmente ubiquitinadas.
• Valide a especificidade do anticorpo e a diluição ótima no seu próprio sistema experimental, pois o desempenho pode variar com o tipo de amostra e tratamento.

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