Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-RNF8 para WB, IHC-P, ELISA - O76064

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RNF8

• A E3 ubiquitina-proteína ligase RNF8 (proteína RING finger 8) é uma mediadora chave da resposta a danos no DNA, recrutada para quebras de fita dupla pela MDC1 fosforilada por ATM, onde catalisa a ubiquitinação ligada a 'Lys-63' das histonas H2A e H2AX, facilitando a montagem de proteínas de reparo de DNA como BRCA1 e TP53BP1 em focos induzidos por radiação ionizante.
  Referências relacionadas: PMID:18001824, PMID:18006705
• A RNF8 promove o recrutamento do complexo de anemia de Fanconi e fatores como o FAAP20 para ligações intercruzadas do DNA ao mediar a ubiquitinação de H2A/H2AX, e também coordena o silenciamento transcricional dependente de ATM próximo a DSBs para evitar colisões entre transcrição e reparo.
• Através de interações distintas com enzimas E2, a RNF8 pode formar cadeias de poliubiquitina ligadas a 'Lys-48' (por exemplo, com UBE2L6), levando à degradação proteassômica de substratos como CHEK2, JMJD2A/KDM4A e KU80/XRCC5, modulando assim a escolha da via de reparo e a acessibilidade da cromatina.
  Referências relacionadas: PMID:11322894, PMID:14981089, PMID:17724460
• Ela contribui para a descondensação da cromatina de ordem superior e ativa indiretamente a quinase ATM ao promover a ubiquitinação da histona H2B que desencadeia a acetilação de H4K16.
• A RNF8 é essencial para a espermatogênese, impulsionando a substituição de histonas durante a maturação do espermatozoide, e participa da recombinação de troca de classe no sistema imunológico através do seu papel no reparo de DSBs.
  Referências relacionadas: PMID:22865450
• A proteína se localiza predominantemente no núcleo, com presença adicional no citoplasma, corpo médio e nos telômeros, o que é consistente com seus papéis multifacetados na progressão do ciclo celular e estabilidade do genoma.
• A expressão tecidual é ubíqua, com níveis mais altos no cérebro, timo e fígado durante o desenvolvimento fetal, e no cérebro e testículo em adultos, destacando sua ampla importância no reparo de DNA e regulação da cromatina.
• A proteína RNF8 contém um domínio RING finger e é classificada como fosfoproteína, com peso molecular de ~55,5 kDa (UniProt: 55518 Da). Palavras-chave também destacam seus envolvimentos em interações hospedeiro-vírus, ligação a metais (zinco) e conjugação de ubiquitina.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 1–260 da região N-terminal da RNF8 humana; portanto, o anticorpo pode reconhecer epítopos dentro da região N-terminal, incluindo o domínio FHA, que está envolvido em interações dependentes de fosforilação.
• Para Western blot, espera-se que a RNF8 migre com um peso molecular aparente de ~56 kDa em lisados de células humanas, de camundongo e rato; execute controles positivos e negativos adequados para confirmar a especificidade.
• Para IHC-P, considere otimizar a recuperação de antígenos (por exemplo, tampão de citrato, pH 6,0) e valide em tecidos com expressão conhecida de RNF8, como testículo ou cérebro.
• Para ELISA, os usuários finais devem determinar as concentrações de revestimento e as condições de detecção ideais usando o antígeno recombinante ou tipos de amostras relevantes.
• A reatividade cruzada com RNF8 de camundongo e rato foi relatada; verifique o desempenho nos sistemas de modelo relevantes antes do uso de rotina.

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