Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-ROCK1 para WB, ELISA - Q13464

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ROCK1

• O ROCK1 é uma proteína quinase serina/treonina que atua como um regulador mestre do citoesqueleto de actina, impulsionando processos essenciais como polaridade celular, contração do músculo liso, formação de fibras de estresse e adesões focais, retração de neuritos, adesão e motilidade celular. Esses efeitos são mediados através da fosforilação de diversos substratos, incluindo DAPK3, GFAP, LIMK1, LIMK2, MYL9/MLC2, TPPP, PFN1 e PPP1R12A (PubMed:10436159, PubMed:10652353, PubMed:11018042). Referências relacionadas: PMID:10436159 PMID:10652353 PMID:11018042

• A fosforilação de FHOD1 pelo ROCK1 promove sinergicamente a formação de blebs na membrana plasmática não apoptótica dependente de SRC (PubMed:18694941). Referências relacionadas: PMID:18694941

• Sob estresse UVB, o ROCK1 fosforila JIP3 e modula o recrutamento consequente de JNK, controlando a sinalização de estresse a jusante (PubMed:19036714). Referências relacionadas: PMID:19036714

• O ROCK1 regula negativamente a ativação de células endoteliais angiogênicas induzida por VEGF, limitando assim a angiogênese excessiva (PubMed:19181962). Referências relacionadas: PMID:19181962

• O ROCK1 está envolvido em processos de diferenciação terminal, contribuindo para a diferenciação eritroide (PubMed:21072057) e promovendo a diferenciação terminal de queratinócitos (PubMed:19997641). Referências relacionadas: PMID:21072057 PMID:19997641

• Subcelularmente, o ROCK1 é distribuído amplamente pelo citoplasma, citoesqueleto (centrossomo/centríolo), membrana do aparelho de Golgi, membrana celular e projeções celulares dinâmicas, incluindo blebs, lamelipódios e ruffles. É detectado em plaquetas sanguíneas.

• Estruturalmente, o ROCK1 contém um domínio quinase, região de hélice superenrolada (coiled-coil) e motivos dedo de zinco, e sua atividade é modulada por fosforilação e acetilação.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para western blotting, note que o ROCK1 de comprimento total tem um peso molecular previsto de aproximadamente 158 kDa. Selecione a porcentagem apropriada de gel de poliacrilamida (por exemplo, 6–8%) e otimize as condições de transferência para proteínas de alto peso molecular. É aconselhável validar a especificidade da banda usando ensaios de competição com peptídeos ou knockdown mediado por siRNA.
• Este anticorpo é confirmado para reatividade com amostras de humano, camundongo e rato; ao usar lisados de outras espécies, a reatividade cruzada deve ser verificada experimentalmente.
• Para aplicações de ELISA, recomenda-se emparelhar o anticorpo com um anticorpo de detecção correspondente e estabelecer a linearidade e sensibilidade do ensaio padrão com a proteína ROCK1 recombinante ou amostras biológicas relevantes.
• Dado o design do imunógeno (um peptídeo dentro dos resíduos 1100–1200), considere que o epítopo está dentro da região C-terminal; condições desnaturantes ou proteólise parcial podem afetar a eficiência de detecção.

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