Anticorpo monoclonal de coelho anti-CTD de Rpb1 para WB, IF/ICC, IHC-P, ChIP e ELISA - P24928

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do CTD de Rpb1

• POLR2A codifica Rpb1, a maior subunidade catalítica da RNA polimerase II (Pol II) dirigida por DNA, responsável pela síntese de precursores de mRNA e RNAs não codificantes. A enzima utiliza o DNA como molde e trifosfatos de ribonucleosídeos para polimerizar RNA, passando pelas etapas de iniciação, elongação e terminação. (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596, PubMed:28108474, PubMed:8381534, PubMed:9852112) Referências relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596, PMID:28108474, PMID:8381534, PMID:9852112
• O CTD de Rpb1, contendo 52 repetições consecutivas de heptapeptídeos, atua como uma plataforma para reguladores da transcrição. A fosforilação em Ser5 (Ser5P) facilita a liberação do promotor, enquanto a fosforilação em Ser2 (Ser2P) é necessária para a liberação da pausa e a elongação. Além disso, a acetilação de lisina no CTD regula a indução de genes de resposta imediata, enquanto a metilação/dimetilação geralmente reprime a expressão dos genes-alvo. (PubMed:24207025, PubMed:26124092) Referências relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• Rpb1 possui atividade de exonuclease 3'→5' que revisa o RNA nascente, permitindo o retrocesso e a clivagem de nucleotídeos incorporados incorretamente. (PubMed:8381534) Referências relacionadas: PMID:8381534
• Além de seu papel dependente de DNA, Rpb1 apresenta atividade de RNA polimerase dependente de RNA, estendendo RNAs não codificantes utilizando um molde interno, e pode replicar o genoma do vírus da hepatite delta quando associado ao antígeno delta pequeno viral.
• Rpb1 localiza-se principalmente no núcleo, onde ocorre a transcrição, mas também foi detectada no citoplasma e nos cromossomos, de acordo com seus papéis na transcrição e suas possíveis funções extranucleares.
• As modificações pós-traducionais de Rpb1 incluem fosforilação, acetilação, metilação, ubiquitinação e sumoilação, regulando dinamicamente sua atividade e suas interações.
• O splicing alternativo de POLR2A produz múltiplas isoformas, embora as diferenças funcionais ainda não tenham sido completamente elucidadas.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 1611-1710 dentro do CTD, sugerindo que o anticorpo detecta Rpb1 total ou um epítopo específico do CTD; verifique a reatividade dependente de fosforilação utilizando amostras tratadas com fosfatase.
• Para Western blotting, prevê-se que a proteína Rpb1 de comprimento total tenha aproximadamente 217 kDa; bandas adicionais (por exemplo, ~64 kDa) podem representar isoformas ou produtos de degradação; valide com controles apropriados.
• Este anticorpo foi aplicado em ensaios de ChIP; otimize as condições de ligação cruzada e fragmentação da cromatina para os seus loci-alvo específicos.
• Para imunofluorescência, espere uma marcação nuclear; faça coloração dupla com um marcador citoplasmático para confirmar a localização.

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