Anticorpo policlonal de coelho anti-RTF1 para WB, ELISA - Q92541

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do RTF1

• RTF1 (homólogo da proteína RTF1 associada à RNA polimerase), também conhecido como GTL7 e KIAA0252, é um componente central do complexo PAF1 (PAF1C), que regula a elongação da transcrição pela RNA polimerase II e a modificação da cromatina.
• O PAF1C associa-se à RNA polimerase II por meio da interação com o domínio C-terminal (CTD) de POLR2A, tanto nas formas não fosforilada quanto fosforilada (Ser-2 e Ser-5), atuando de forma independente e sinérgica com fatores de elongação, como TCEA1.
• O complexo é essencial para a transcrição de genes do desenvolvimento, incluindo genes-alvo Hox e Wnt, e desempenha um papel na hematopoiese e na leucemogênese por meio da associação com oncoproteínas rearranjadas KMT2A/MLL1.
• RTF1 está localizado no nucleoplasma dentro do núcleo, em consonância com seu papel na regulação da transcrição.
• O PAF1C está envolvido em modificações de histonas: recruta a ligase E3 de ubiquitina RNF20/40 e as enzimas E2 UBE2A/B para catalisar a monoubiquitinação da histona H2B em Lys-120 (H2BK120ub1), sendo também necessário para a trimetilação da histona H3 em Lys-4 (H3K4me3) nos genes de pluripotência de células-tronco.
• A proteína contém um domínio de hélice enrolada, liga-se ao DNA de fita simples e é regulada por fosforilação.
• Durante a infecção pelo vírus influenza A H3N2, o PAF1C interage com a proteína viral NS1 para modular a transcrição de genes do hospedeiro.
• RTF1 é necessário para a indução máxima dos genes de resposta ao choque térmico.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno foi um peptídeo sintético abrangendo os aminoácidos 300-400 do RTF1 humano; considere utilizar essa região para verificar a especificidade do anticorpo por meio de experimentos de bloqueio com peptídeo.
• Para Western blot, o RTF1 humano apresenta peso molecular previsto de aproximadamente 80 kDa; valide com controles positivos e negativos apropriados (por exemplo, lisados de células humanas e de camundongo), pois foi relatada reatividade cruzada com camundongo.
• O anticorpo é adequado para ELISA; otimize as condições de revestimento e detecção com base na localização nucleoplasmática do alvo.
• RTF1 é uma fosfoproteína; esteja ciente de que modificações pós-traducionais podem afetar a detecção em determinadas preparações de amostras; considere o uso de inibidores de fosfatase nos tampões de lise, se necessário.
• Para obter um sinal mais intenso, extratos nucleares podem ser benéficos devido à localização nuclear do RTF1.

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