Anticorpo Policlonico de Coelho Anti-Rubicon para WB, ELISA - Q92622

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Rubicon

• Rubicon (proteína contendo o domínio Run que interage com Beclin-1 e domínio rico em cisteína), também conhecido como Baron, é codificado pelo gene RUBCN (KIAA0226). O splicing alternativo produz múltiplas isoformas.
• Rubicon funciona como um inibidor central da autofagia e do tráfego endossomal: ele suprime a atividade da PIK3C3, prejudica a função do complexo PI3KC3-C2, bloqueia a maturação do autofagossomo e impede a ativação de Rab7 dependente de UVRAG nos endossomos. Referências relacionadas: PMID:20974968 PMID:21062745
• Em macrófagos ativados, Rubicon promove respostas antibacterianas ao estabilizar o complexo NADPH oxidase CYBA:CYBB, aumentando a produção de ROS dependente de TLR2 e a eliminação fagocitária. Referências relacionadas: PMID:22423966
• Após infecção fúngica ou viral, Rubicon regula negativamente a produção de citocinas pró-inflamatórias ao se ligar a CARD9 e sequestrá-lo dos complexos de sinalização. Referências relacionadas: PMID:22423967
• Subcelularmente, Rubicon se localiza em endossomos tardios, lisossomos e endossomos iniciais, o que é consistente com seus papéis no tráfego endocítico e na regulação do autofagossomo.
• A proteína contém locais de fosforilação e está sujeita a modificações pós-traducionais; ela está implicada em vias de neurodegeneração e foi identificada em estudos de proteômica.
• Peso molecular previsto de 108,6 kDa; experimentalmente, migra a aproximadamente 109 kDa em SDS-PAGE.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde ao domínio N-terminal (aminoácidos 1-200), que pode detectar todas as isoformas conhecidas. Verifique a especificidade em lisados de células e tecidos relevantes.
• Para Western blotting, considere o uso de SDS-PAGE redutor e membrana de nitrocelulose; a banda esperada é de ~109 kDa.
• As concentrações de trabalho ideais devem ser determinadas experimentalmente; as diluições iniciais típicas para anticorpos policlonais em WB variam de 1:500 a 1:2000.
• O anticorpo tem reatividade cruzada com Rubicon de camundongo e rato, sendo adequado para estudos comparativos em modelos de roedores.
• Para ELISA, considere usar o imunógeno recombinante como controle positivo e titular o anticorpo de acordo.
• Valide o anticorpo no seu sistema experimental específico usando controles positivos e negativos (por exemplo, lisados de knockdown ou knockout de RUBCN).

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