Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-RXRα para WB, IP, IF/ICC, ChIP, ChIP-seq, ELISA - P19793

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do RXRα

• RXRα (receptor de ácido retinoico RXR-alfa) é um receptor nuclear codificado pelo gene RXRA, também designado NR2B1. Ele pertence à superfamília dos receptores nucleares e funciona como um fator de transcrição dependente de ligante que se liga ao ácido 9-cis retinoico com alta afinidade. PubMed:1310260 Referências relacionadas: PMID:1310260

• No núcleo, o RXRα forma heterodímeros com receptores de ácido retinoico (RARs) e se liga aos elementos de resposta ao ácido retinoico (RAREs) compostos por sítios tandem 5'-AGGTCA-3' (DR1-DR5). Na ausência de ligante, os heterodímeros RXR-RAR recrutam complexos correpressores que promovem a desacetilação de histonas e a condensação da cromatina, reprimindo a transcrição. A ligação do ligante desencadeia a dissociação do corepressor e o recrutamento do coativador, levando à ativação transcricional. PubMed:10195690, PubMed:11162439, PubMed:11915042, PubMed:20215566, PubMed:37478846, PubMed:9267036 Referências relacionadas: PMID:10195690 PMID:11162439 PMID:11915042 PMID:20215566 PMID:37478846 PMID:9267036

• O RXRα atua como um parceiro heterodimérico comum para vários outros receptores nucleares, incluindo o PPARα. O heterodímero RXRA/PPARA é essencial para a atividade transcricional do PPARα em genes de oxidação de ácidos graxos, como o ACOX1, e em genes do sistema citocromo P450. PubMed:10195690, PubMed:11915042, PubMed:28167758 Referências relacionadas: PMID:10195690 PMID:11915042 PMID:28167758

• A localização subcelular inclui o núcleo, onde exerce suas funções de regulação transcricional, além do citoplasma e das mitocôndrias. Seu transporte shuttle pode facilitar a importação nuclear de parceiros de heterodimerização, como VDR e NR4A1. PubMed:12145331, PubMed:15509776 Referências relacionadas: PMID:12145331 PMID:15509776

• O RXRα sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, fosforilação e ubiquitinação (formação de ligação isopeptídica). Essas modificações regulam sua estabilidade, afinidade de ligação ao DNA e atividade transcricional. Palavras-chave: Acetilação, Fosfoproteína, Conjugação Ubl, Ligação isopeptídica.

• Além da regulação metabólica, o RXRα desempenha um papel na imunidade inata ao regular negativamente genes antivirais, como o IFN tipo I, atenuando assim as respostas imunológicas durante a infecção viral. Ele também promove a fagocitose de detritos de mielina e a remielinização em macrófagos. PubMed:25417649, PubMed:26463675 Referências relacionadas: PMID:25417649 PMID:26463675

• A expressão tecidual é ampla: altamente expressa no fígado, rim e cérebro; também detectada em fibroblastos pulmonares e monócitos. Seu papel na senescência celular está ligado à repressão do ITPR2 e à regulação da sinalização de cálcio. PubMed:30216632, PubMed:26463675, PubMed:14702039, PubMed:2159111, PubMed:24275569 Referências relacionadas: PMID:30216632 PMID:26463675 PMID:14702039 PMID:2159111 PMID:24275569

• O heterodímero RXRα/RARB pode atuar tanto como repressor quanto como ativador transcricional, dependendo do contexto do elemento de DNA RARE, destacando seu papel versátil na regulação gênica. PubMed:29021580 Referências relacionadas: PMID:29021580

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aa 1-100) do RXRα humano, um domínio envolvido na transativação dependente de ligante e possivelmente em interações com coreguladores. Essa estratégia de design pode conferir alta especificidade e afinidade tanto para formas não modificadas quanto para formas modificadas pós-traducionalmente do receptor.

• O anticorpo é validado para Western blotting (WB) para detectar uma banda de 51 kDa. Dada a expressão ubíqua do RXRα no fígado, rim e cérebro, esses tecidos servem como controles positivos adequados. Para imunoprecipitação (IP), considere usar extratos nucleares de células em cultura ou amostras de tecido.

• Na imunoprecipitação de cromatina (ChIP) e no ChIP-seq, o RXRα é recrutado para RAREs em todo o genoma. Um locus de controle positivo bem caracterizado é o gene do receptor beta de ácido retinoico (RARB), que contém um RARE DR5 canônico. Para obter melhores resultados, trate as células com ácido 9-cis retinoico ou ácido all-trans retinoico antes da reticulação.

• Para imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), o anticorpo pode ser usado para monitorar a translocação nuclear do RXRα após estimulação com ligante. A co-coloração com um marcador nuclear ou marcadores de organelas (por exemplo, corante mitocondrial) pode fornecer contexto adicional de localização.

• Ao realizar ELISA sanduíche, o pareamento deste anticorpo monoclonal com um anticorpo de detecção policlonal direcionado a um epítopo distinto pode aumentar a sensibilidade. Valide o ensaio usando padrões de proteína RXRα recombinante e verifique a reatividade cruzada com outras isoformas de RXR (RXRβ, RXRγ), se necessário.

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