Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-S100A8 para WB, IHC-P, ELISA - P27005

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da S100A8

• A S100A8 é uma pequena proteína de ligação ao cálcio e zinco (10295 Da) pertencente à família S100, também conhecida como calgranulina-A, MRP-8, p8 e CP-10.
• Desempenha um papel proeminente na regulação de processos inflamatórios e respostas imunes inatas, principalmente induzindo quimiotaxia e adesão de neutrófilos.
• Intracelularmente, como parte do complexo S100A8/A9 (calprotectina), facilita o tráfego de ácido araquidónico nos leucócitos, modula a reorganização do citoesqueleto dependente da tubulina durante a migração de fagócitos e ativa a NADPH-oxidase promovendo a montagem do complexo enzimático e transferindo ácido araquidónico para o complexo.
• Extracelularmente, a S100A8 atua como uma molécula alarmina ou DAMP, ligando-se a recetores de reconhecimento de padrões como TLR4 e AGER, o que desencadeia a sinalização da quinase MAP e NF-κB para amplificar cascatas pró-inflamatórias; também possui atividade antimicrobiana direta via quelação de Zn²⁺.
• A proteína pode induzir morte celular através de autofagia e apoptose via comunicação cruzada entre mitocôndrias e lisossomas envolvendo ROS e BNIP3, e regula a sobrevivência de neutrófilos através das vias ITGAM/ITGB e TLR4 mediadas por MEK-ERK.
• De acordo com palavras-chave UniProt e dados funcionais, a S100A8 está envolvida em eventos de S-nitrosilação como parte do complexo transnitrosilase iNOS-S100A8/A9, contribuindo para a modificação seletiva de proteínas alvo.
• Subcelularmente, a S100A8 é encontrada no citoplasma, associada ao citoesqueleto, na membrana celular e também é secretada para o espaço extracelular.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio utilizado foi uma proteína recombinante que abrange os aminoácidos 1-89 da S100A8 de rato (NP_038678.1). Dado que esta sequência corresponde a quase toda a proteína (peso molecular previsto ~10 kDa), o anticorpo deve reconhecer a forma nativa. Para Western blot, espere uma banda em torno de 10–12 kDa; a redução e desnaturação podem ajudar a expor totalmente o epítopo.
• Como um anticorpo policlonal, pode ter uma ligeira variação de lote para lote; considere validar o desempenho com um controlo positivo conhecido, como lisado de medula óssea ou baço de rato, ou células estimuladas a expressar S100A8 (por exemplo, macrófagos tratados com LPS).
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), as condições de recuperação de antigénio (por exemplo, recuperação de epítopo induzida por calor com tampão citrato pH 6.0) devem ser otimizadas, e o bloqueio da peroxidase endógena pode ser necessário. Verifique a reatividade cruzada com tecidos de rato, conforme observado.
• Em aplicações de ELISA, revestir com S100A8 recombinante ou usar um formato sanduíche com um par de anticorpos correspondente; confirme a especificidade com controlos negativos relevantes.

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