Anticorpo Policlonal Anti-SARS-CoV-2 3CLpro para WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da 3CLpro do SARS-CoV-2

• A glicoproteína Spike (S) é uma proteína de fusão viral de classe I que medeia a entrada do SARS-CoV-2 nas células hospedeiras. É sintetizada como um precursor e clivada proteoliticamente em subunidades S1 e S2.
• A subunidade S1 contém o domínio de ligação ao receptor (RBD) que se engaja ao receptor humano ACE2 (enzima conversora de angiotensina 2) para facilitar a fixação viral às células hospedeiras. Referências relacionadas: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Vias de entrada alternativas utilizam neuropilina-1 (NRP1), NRP2, integrinas ou ASGR1, que podem contribuir para o tropismo tecidual, particularmente em células epiteliais olfativas que expressam níveis baixos de ACE2. Referências relacionadas: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• A subunidade S2 medeia a fusão da membrana através de um rearranjo conformacional dependente de dobradiça, transitando do estado de pré-fusão para o estado de grampos pós-fusão, exigindo clivagem no local S2' por proteases hospedeiras, como TMPRSS2 ou catepsina L. Referências relacionadas: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• O domínio do caule da S contém três dobradiças, proporcionando à cabeça de ligação ao receptor uma liberdade orientacional notável, o que pode facilitar a evasão imunológica. Referências relacionadas: PMID:32817270
• A localização subcelular inclui a membrana do vírion, a membrana do compartimento intermediário entre o retículo endoplasmático e o Golgi (ERGIC) do hospedeiro e a membrana da célula hospedeira, consistente com seus papéis na montagem, saída e entrada.
• A proteína é fortemente glicosilada e contém ligações dissulfeto conservadas, regiões de hélice superenrolada (coiled-coil) e domínios transmembrana; também exibe propriedades superantigênicas e contribui para a evasão imunológica.
• Seu peso molecular é de aproximadamente 141 kDa e é um alvo chave para anticorpos neutralizantes, ensaios diagnósticos e desenvolvimento de vacinas.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Dado que o imunógeno é um fragmento recombinante da 3CLpro (aminoácidos 1-306), use controles positivos apropriados, como lisados de células infectadas com SARS-CoV-2 ou 3CLpro recombinante purificada, para validar a especificidade.
• Para Western blotting, considere otimizar as condições de bloqueio e diluição do anticorpo; espera-se uma banda em aproximadamente 34 kDa (3CLpro de comprimento total), mas o fornecedor relata uma banda de 141 kDa (provavelmente correspondente à proteína Spike). Verifique a banda detectada com marcadores de peso molecular apropriados e antígenos de controle.
• Em experimentos de imunofluorescência/ICC, inclua etapas de permeabilização para a detecção de proteases intracelulares e contracorione com marcadores de organelas para avaliar a localização subcelular.
• Para ELISA, a natureza policlonal permite o uso como anticorpo de captura e detecção em formatos sanduíche. Combine com anticorpos monoclonais contra epítopos distintos para melhorar a especificidade e a relação sinal-ruído.
• Considere a potencial reatividade cruzada com a 3CLpro de outros coronavírus; o alinhamento de sequências e ensaios de inibição competitiva podem auxiliar na confirmação da especificidade.
• Valide sempre o anticorpo em seu sistema experimental específico, pois o desempenho pode variar com o tipo de amostra e os métodos de fixação.

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