Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-SARS-CoV-2 NSP12 para WB, ELISA - P0DTD1

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da NSP12 do SARS-CoV-2

• A NSP12 é a polimerase de RNA dirigida a RNA (RdRp) que catalisa a transcrição do RNA genómico e subgenómico viral, essencial para a replicação do SARS-CoV-2. Referências relacionadas: PMID:32277040 PMID:32358203 PMID:32438371
• Juntamente com as proteínas acessórias nsp7 e nsp8, a NSP12 forma um complexo de replicação altamente processivo necessário para a síntese eficiente de RNA. Referências relacionadas: PMID:32277040 PMID:32358203 PMID:32438371
• O domínio NiRAN, semelhante a cinase, da NSP12 anexa um ou mais nucleótidos ao N-termino da NSP9, criando um iniciador de RNA-proteína covalente para o início da transcrição. Referências relacionadas: PMID:37794589
• A NSP12 executa a transcrição descontínua fazendo pausas nas sequências reguladoras de transcrição (TRS) e saltando para a TRS líder, levando à produção de RNAm subgenómicos. Referências relacionadas: PMID:35706445
• A NSP12 é uma subunidade da enzima de captação de RNA viral e catalisa a reação de guanililtransferase formando a estrutura de cap central GpppA-RNA, crucial para a estabilidade do RNAm e evasão imunitária. Referências relacionadas: PMID:35944563
• A nível subcelular, a NSP12 localiza-se predominantemente no citoplasma do hospedeiro e é recrutada para vesículas de dupla membrana e complexos de replicação perinucleares derivados do retículo endoplasmático.
• Como um interveniente central na replicação do coronavírus, a NSP12 é o alvo de principais antivirais como o remdesivir e o molnupiravir.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blot, esteja ciente de que o anticorpo pode detetar tanto o precursor da poliproteína replicase completa (~794 kDa) como a NSP12 madura após o processamento proteolítico. É aconselhável validar a deteção em lisados de células infetadas com SARS-CoV-2 ou sistemas que expressem NSP12 recombinante.
• Em aplicações de ELISA, a natureza policlonal pode aumentar a sensibilidade; no entanto, a reatividade cruzada com proteínas não relacionadas ou outros coronavírus deve ser excluída usando controlos adequados.
• Dado que o imunogénio é um peptídeo sintético (aminoácidos 200–300 da NSP12), confirme que o epítopo permanece acessível nas condições do seu ensaio (desnaturado vs. nativo).
• Para a deteção intracelular por imunofluorescência, considere que a NSP12 está associada a complexos de replicação viral nas membranas do hospedeiro; a fixação/permeabilização pode necessitar de otimização.

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