Anticorpo Policlonel de Coelho Anti-SARS-CoV-2 NSP15 para WB, ELISA - P0DTD1

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da NSP15

• A NSP15 é codificada pelo gene rep do SARS-CoV-2 como parte da grande poliproteína ORF1ab (também conhecida como poliproteína da replicase 1ab), que é processada proteoliticamente em múltiplas proteínas não estruturais (NSPs) essenciais para o ciclo de vida viral.
• A NSP15 funciona como uma endorribonuclease específica de uridilato (EndoU) que desempenha um papel fundamental na transcrição e replicação viral, degradando as 5'-poliuridinas geradas durante a replicação da região poli(A) dos RNAs genômicos e subgenômicos virais. Essa atividade impede o acúmulo de RNA poli(U) que, de outra forma, hibridizaria com caudas poli(A) e ativaria sensores de dsRNA do hospedeiro, evitando assim a detecção imune inata. Referências relacionadas: PMID:33504779 PMID:33564093
• A atividade endonuclease da NSP15 impede a ativação simultânea de sensores de dsRNA da célula hospedeira, incluindo MDA5/IFIH1, OAS e PKR, facilitando a evasão imune.
• Já foi demonstrado que a NSP15 se liga ao dsRNA genômico em associação com o complexo de replicação-transcrição (RTC) e também pode contribuir para a transcrição descontínua pela nsp12. Referências relacionadas: PMID:34562452 PMID:35706445
• A NSP15 catalisa uma reação de duas etapas: transesterificação 2'-O gerando um fosfato 2',3'-cíclico, seguida por hidrólise para um fosfato 3'. Referências relacionadas: PMID:33504779 PMID:33564093
• Como componente da poliproteína da replicase, a NSP15 se localiza nas organelas de replicação citoplasmáticas do hospedeiro, incluindo vesículas de membrana dupla derivadas do retículo endoplasmático, onde ocorre a síntese do RNA viral (por similaridade, com base em palavras-chave de localização da poliproteína).
• A proteína NSP15 é conservada entre os coronavírus e é considerada um alvo antiviral atraente devido aos seus papéis na replicação viral e evasão imune.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde a um peptídeo sintético na região da NSP15 (aminoácidos 6600-6700 de YP_009724389.1); portanto, espera-se que o anticorpo reconheça a NSP15, mas também pode detectar a poliproteína ORF1ab não processada em lisados de células infectadas. Para Western blot (WB), considere usar lisados de células infectadas pelo SARS-CoV-2 e valide o padrão de bandas com controles apropriados.
• Para ELISA, imobilize a proteína NSP15 recombinante ou o peptídeo imunizante, e otimize as condições de revestimento e as diluições do anticorpo. Como se trata de um anticorpo policlonal, a consistência entre lotes deve ser verificada.
• A reatividade cruzada com outros coronavírus ou proteínas do hospedeiro não foi testada; valide em seu sistema experimental específico, se necessário.

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