Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-SARS-CoV-2 Spike S2 ECD para WB, DB, IF/ICC, IP e ELISA - P0DTC2

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Glicoproteína Spike (S)

• A glicoproteína spike (S) é uma proteína de fusão viral de classe I que é clivada nas subunidades S1 e S2. A S1 contém o domínio de ligação ao receptor, enquanto a S2 ancla a proteína e executa a fusão de membranas.
• A S1 se liga ao receptor hospedeiro ACE2 para iniciar a infecção. Receptores de entrada alternativos incluem a neuropilina-1 (NRP1), neuropilina-2 (NRP2), integrinas e o receptor 1 de asialoglicoproteína (ASGR1), que podem contribuir para o tropismo do SARS-CoV-2 em células com baixa expressão de ACE2.
  Referências relacionadas:
  PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086, PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• A clivagem proteolítica da S2 no sítio S2' pela TMPRSS2 hospedeira (superfície celular) ou pela catepsina L (endossomal) desencadeia alterações conformacionais irreversíveis que levam à fusão do envelope viral com a membrana do hospedeiro, liberando o genoma viral no citoplasma.
  Referências relacionadas:
  PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• A subunidade S2 contém regiões de repetição heptádica (HR1 e HR2) que se dobram em um feixe de seis hélices, aproximando as membranas viral e celular para a fusão.
• Subcelularmente, a proteína spike se localiza na membrana do virion, no compartimento intermediário ER-Golgi do hospedeiro (ERGIC) e na membrana plasmática da célula hospedeira.
• A Spike é extensivamente N-glicosilada e palmitoilada, contém pontes dissulfeto, funciona como superantígeno; também suprime as respostas imunes inatas do hospedeiro e neutraliza a tetherina.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange o domínio extracelular da S2 (aa 686-1214), cobrindo elementos funcionais conservados, incluindo o peptídeo de fusão e as repetições heptádicas. Este design permite a detecção da S2 mesmo após a perda da S1.
• Para Western blot, a proteína spike de comprimento total migra a ~141 kDa em condições redutoras; uma banda de ~70-80 kDa pode ser observada para a S2 clivada. Valide suas condições de lise e preparação de amostras.
• Em imunofluorescência/ICC, inclua uma etapa de permeabilização para detectar a spike localizada em compartimentos intracelulares (ERGIC), além da membrana plasmática.
• Para ELISA de captura, considere combinar este pAb com um anticorpo monoclonal contra a subunidade S1 para medir especificamente a spike de comprimento total, ou use-o como reagente de detecção para quantificar os níveis de S2.
• O Dot blot (DB) pode ser usado para triagem rápida da expressão do antígeno em lisados celulares ou proteínas recombinantes; otimize a concentração do antígeno e as condições do tampão.
• A imunoprecipitação (IP) pode capturar complexos de spike; inclua controles negativos adequados para avaliar a ligação não específica.

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