Anticorpo Policlonal Anti-SARS-CoV-2 Spike S2 para WB, IP, ELISA - P0DTC2

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Glicoproteína Spike (Subunidade S2)

• A glicoproteína spike (S) é uma proteína de fusão viral de classe I e o principal antigénio de superfície do SARS-CoV-2. Ela medeia a ligação inicial às células hospedeiras através da ligação do domínio de ligação ao recetor (RBD) na subunidade S1 ao recetor da enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2). Referências relacionadas: PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• Após a ligação ao recetor, a proteína S é clivada proteoliticamente no local S2′ por proteases hospedeiras, como a protease transmembrana serina 2 (TMPRSS2) ou a catepsina L, desencadeando reorganizações conformacionais na subunidade S2 que impulsionam a fusão do envelope viral com a membrana da célula hospedeira. Referências relacionadas: PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• O vírus também pode empregar recetores de entrada alternativos, incluindo a neuropilina-1 (NRP1) e a neuropilina-2 (NRP2), que são altamente expressas em células epiteliais olfativas e podem explicar os sintomas de anosmia; integrinas; e o recetor de glicoproteína asialo 1 (ASGR1) de forma independente da ACE2. Referências relacionadas: PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Localização subcelular: A proteína S está presente na membrana do vírion e trafega através da membrana do compartimento intermediário entre o retículo endoplasmático e o complexo de Golgi (ERGIC) da célula hospedeira; a fusão ocorre na membrana da célula hospedeira ou dentro de endossomas.
• Modificações pós-traducionais incluem glicosilação N-ligada extensa, ligações dissulfeto, palmitoilagem e clivagem em subunidades S1 e S2. Palavras-chave do UniProt: proteína de envelope viral, transmembrana, glicoproteína, interação hospedeiro-vírus, imunoevasão viral, superantigénio e inibição da imunidade inata do hospedeiro.
• O domínio da haste da proteína S contém três dobradiças flexíveis que permitem considerável liberdade de orientação da cabeça de ligação ao recetor, uma característica crítica para a evasão imunitária e o envolvimento do recetor. Referências relacionadas: PMID:32817270

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um peptídeo sintético que abrange os aminoácidos 1174–1273 da subunidade S2 (com base na sequência de referência YP_009724390.1). Espera-se que o anticorpo reconheça tanto a proteína spike de comprimento total (~141 kDa) como o fragmento de clivagem S2.
• Para Western blot, utilize condições de SDS-PAGE redutoras. Deve ser observada uma banda correspondente à spike de comprimento total em aproximadamente 141 kDa; bandas de baixo peso molecular representando produtos de clivagem S2 também podem aparecer. Em condições não redutoras, oligómeros de ordem superior (trímeros) podem ser detetados.
• Inclua controlos positivos apropriados, como lisados de células infetadas com SARS-CoV-2 ou proteína spike recombinante. É recomendado um controlo de carregamento (por exemplo, GAPDH, β-actina).
• Para imunoprecipitação, considere o uso de contas de proteína A/G pré-acopladas com o anticorpo para minimizar a deteção de bandas da cadeia pesada.
• Em ELISA, este anticorpo policlonal pode servir como reagente de captura ou deteção em ensaios sanduíche para quantificação da proteína spike. Otimize as concentrações de revestimento e os tampões de bloqueio para o seu formato de placa específico.

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