Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Spike RBD do SARS-CoV para WB e ELISA - P59594

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Glicoproteína Spike

• A glicoproteína Spike (S) do SARS-CoV, também conhecida como proteína E2 ou peplômero, é uma proteína de fusão viral classe I que media a entrada do vírus nas células hospedeiras.
• Ela liga o vírion à membrana da célula hospedeira interagindo com receptores do hospedeiro, principalmente a enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2) e CLEC4M/DC-SIGNR, iniciando a infecção.
• Após a ligação ao receptor e a internalização do vírus nos endossomos, a proteína S sofre mudanças conformacionais. A clivagem proteolítica pela catepsina L (CTSL) do hospedeiro expõe o peptídeo de fusão, permitindo a fusão das membranas viral e endossômica.
• A proteína S também atua como uma imunoevasina viral ao regular negativamente a tetherina (BST2) do hospedeiro através da degradação lisossomal, neutralizando a resposta imune inata do hospedeiro.
• Subcelularmente, a proteína Spike está localizada na membrana do vírion, na membrana da célula hospedeira e na membrana do compartimento intermediário retículo endoplasmático-Golgi do hospedeiro.
• Características estruturais principais incluem um peptídeo sinal, um grande ectodomínio contendo o domínio de ligação ao receptor (RBD), regiões de repetição heptádicas que formam uma estrutura trímera de alfinetes de cabelo em bobina, um domínio transmembrana e uma cauda citoplasmática. É glicosilada em N, contém ligações dissulfeto e é palmitoilada.
• A glicoproteína Spike é essencial para a entrada do vírus, virulência e imunoevasão, tornando-a um alvo principal para reagentes de diagnóstico e desenvolvimento de vacinas.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 350-450 dentro do RBD da proteína Spike, portanto, este anticorpo pode detectar a proteína Spike de comprimento total (~139 kDa) ou a subunidade S1 clivada em WB sob condições redutoras ou não redutoras.
• Para WB, considere usar SDS-PAGE com controles apropriados, como proteína Spike recombinante ou lisados de células infectadas por SARS-CoV. Valide o anticorpo no sistema de amostra relevante para confirmar a especificidade.
• Para ELISA, ensaios de captura ou detecção podem ser projetados usando RBD ou proteína Spike recombinante. Os tampões de revestimento ideais e as diluições do anticorpo devem ser determinados experimentalmente.
• Devido à especificidade para o RBD, este anticorpo pode ser útil em ensaios de neutralização ou competição, mas tais aplicações requerem validação individual.

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