Anticorpo policlonal de coelho anti-SIGLEC3/CD33 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P20138

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de SIGLEC3/CD33

• CD33 (Siglec-3, p67, gp67) é uma proteína de membrana do tipo I de passagem única e membro da família de lectinas semelhantes à imunoglobulina ligantes de ácido siálico (Siglec), caracterizada por um domínio semelhante à imunoglobulina do tipo V na extremidade N-terminal e uma cauda citoplasmática contendo dois motivos inibitórios baseados em tirosina de receptores imunes (ITIMs).
• Funciona como um receptor inibitório; após o contato com ligantes de ácido siálico ou C1q, os ITIMs são fosforilados por quinases semelhantes à Src, como LCK, levando ao recrutamento das tirosina-fosfatases PTPN6/SHP-1 e PTPN11/SHP-2, que regulam negativamente a sinalização imune (PubMed:10887109, 10556798, 10206955). Referências relacionadas: PMID:10887109, PMID:10556798, PMID:10206955
• Liga-se preferencialmente a ácidos siálicos ligados por alfa-2,3 e alfa-2,6, apresentando maior avidez por glicanos ligados por alfa-2,6 (PubMed:7718872). Referências relacionadas: PMID:7718872
• O efeito repressivo de CD33 sobre a ativação de monócitos envolve a sinalização da fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) (PubMed:15597323). Referências relacionadas: PMID:15597323
• Subcelularmente, CD33 está localizado na membrana plasmática e nos peroxissomos.
• É expresso especificamente em células da linhagem monocítica/mieloide, incluindo monócitos, macrófagos e granulócitos; no sistema nervoso central, é encontrado predominantemente nas células microgliais.
• As palavras-chave destacam seus papéis na adesão celular, na regulação imune e no splicing alternativo, com modificações documentadas de glicoproteínas e fosfoproteínas.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 49-259 de CD33 humano (domínio extracelular), que inclui o domínio Ig do tipo V ligante de ácido siálico. Esse projeto tem como alvo a conformação nativa, tornando-o adequado para detectar CD33 expresso na superfície em aplicações semelhantes à citometria de fluxo (IF/ICC) e em imuno-histoquímica (IHC-P).
• Para Western blot (WB), o peso esperado da proteína é de aproximadamente 40 kDa, mas, devido à glicosilação, a banda observada pode aparecer em um peso molecular mais alto. Recomenda-se utilizar um gel redutor e validar com controles positivos apropriados (por exemplo, linhagens celulares mieloides como HL-60 ou THP-1).
• Ao utilizar este anticorpo policlonal em imunoprecipitação ou ELISA, considere que a natureza policlonal pode aumentar a sensibilidade, mas também pode elevar o background; recomenda-se otimizar as condições de bloqueio e lavagem.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato implica a conservação dos epítopos; no entanto, o alinhamento de sequências deve ser verificado para contextos experimentais específicos, e a validação na espécie relevante é essencial.
• Para IHC-P, os métodos de recuperação antigênica (por exemplo, tampão citrato, pH 6,0) e as condições de fixação dos tecidos devem ser otimizados, pois a acessibilidade dos epítopos pode variar.
• Este anticorpo é adequado como componente de captura ou detecção em ELISA sanduíche quando associado a um anticorpo compatível; os usuários devem verificar seu desempenho em seus sistemas de tampão específicos.

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