Anticorpo Policlonico de Coelho Anti-SLC12A1 para WB, ELISA - Q13621

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de SLC12A1

• SLC12A1 codifica o co-transportador de Na-K-2Cl específico do rim (NKCC2), membro da família de transportadores de solutos 12, que media o transporte eletro-neutro de sódio, potássio e íons cloreto através da membrana apical do ramo espesso (TAL) da alça de Henle. Referências relacionadas: PMID:21321328
• NKCC2 é essencial para a reabsorção transepitelial de NaCl no TAL, impulsionando a concentração urinária e a regulação do volume; ele é o alvo principal dos diuréticos de alça como a bumetanida.
• O transportador pode substituir funcionalmente amônio (NH4+) por potássio, facilitando a secreção apical de NH4+ no TAL medular, um processo crítico para a homeostase renal do amônio durante acidose metabólica.
• A expressão de SLC12A1 é altamente específica do rim, com a localização proteica restrita à membrana plasmática apical das células dos ramos espessos cortical e medular do rim.
• As modificações pós-tradução incluem glicosilação N-ligada e fosforilação, que regulam o tráfego e a atividade do transportador em resposta à vasopressina e outros sinais hormonais.
• Mutações em SLC12A1 causam a síndrome de Bartter tipo 1, uma distúrbio renal de perda de sal caracterizado por alcalose hipocalêmica, hipercalciúria e poliúria, destacando o papel crítico de NKCC2 no equilíbrio eletrolítico.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente aos resíduos 50–150 de SLC12A1 humano. Verifique a conservação do epitopo se estiver usando amostras não humanas, embora a reatividade cruzada com camundongo e rato tenha sido confirmada.
• Para Western blotting de NKCC2 (massa molecular prevista ~121 kDa), considere o uso de um gel de poliacrilamida de baixa porcentagem (ex: 6–8%) e tempos de transferência prolongados para garantir a transferência eficiente dessa proteína de membrana glicosilada de grande porte.
• Inclua inibidores de fosfatase nos tampões de lise e considere o tratamento com fosfatase para resolver deslocamentos de banda dependentes de fosforilação, já que NKCC2 é regulado por fosforilação em resposta a hormônios.
• Para aplicações de ELISA, um projeto de ensaio competitivo com o peptídeo de imunização ou um formato de captura usando um fragmento do domínio extracelular recombinante pode ser adequado; otimize o tampão de revestimento e as condições de bloqueio para minimizar a ligação inespecífica.

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