Anticorpo Policlonal Anti-Smad4 para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13485

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Smad4

• SMAD4 é o mediador comum (co-SMAD) da transdução de sinal da superfamília TGF-β. Ele forma um complexo heterotrimérico com SMADs regulados por receptor (por exemplo, SMAD2/3) no núcleo, o que é essencial para a regulação transcricional mediada por TGF-β.
  Referências relacionadas:
  PMID:25514493
• Atua como coativador transcricional: SMAD4 facilita a ligação do complexo SMAD2/SMAD4/FAST-1 ao DNA e fornece um domínio de ativação para a transcrição regulada por SMAD1 ou SMAD2. Ele também participa do complexo do fator de transcrição AP-1 (SMAD3/SMAD4/JUN/FOS) para sinergizar as respostas ao TGF-β.
• Funciona como supressor tumoral; a perda ou inativação de SMAD4 é um evento frequente no adenocarcinoma ductal pancreático, câncer colorretal e outras neoplasias, destacando seu papel no controle do crescimento celular.
• Na fisiologia muscular, SMAD4 atua como um interruptor nodal: quando recrutado pela miostatina (MSTN), promove a atrofia por meio da sinalização SMAD2/4; quando liberado, desloca-se para a hipertrofia mediada por BMP via SMAD1/5/8 (por similaridade).
• SMAD4 regula positivamente a atividade da quinase PDPK1 ao promover sua dissociação da proteína inibitória 14-3-3 YWHAQ.
• Localiza-se tanto no citoplasma quanto no núcleo; a translocação nuclear é induzida após estimulação por TGF-β ou BMP, onde se acumula em complexos transcricionalmente ativos.
• Contém o domínio MH1 N-terminal para ligação ao DNA em SBEs (5’-GTCT/AGAC-3’) e o domínio MH2 C-terminal para interação com receptor, oligomerização e ativação transcricional. A proteína sofre processos de acetilação, fosforilação e ubiquitinação.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde ao domínio MH2 C-terminal (aa 320–552), que é altamente conservado entre humano, camundongo e rato, o que é consistente com a reatividade cruzada relatada. Para espécies novas, recomenda-se o alinhamento de sequência.
• Para Western blotting (WB), é esperada uma banda de aproximadamente 60 kDa. Use controles de carga apropriados e valide em lisados tratados com TGF-β versus não tratados para confirmar a especificidade.
• Para imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC) e imunohistoquímica (IHC-P), pode ser observada coloração nuclear ou citoplasmática dependendo do contexto de sinalização. Inclua controles negativos apropriados (por exemplo, linhagens celulares knockout ou peptídeo de bloqueio) para verificar a especificidade do sinal.
• Para aplicações em ELISA, otimize as condições de revestimento do antígeno e detecção. O anticorpo pode ser pareado com anticorpos monoclonais contra diferentes epítopos para desenvolver sistemas de ELISA sanduíche para quantificação de SMAD4.
• Dada a natureza policlonal do anticorpo, a consistência entre lotes deve ser verificada em ensaios quantitativos críticos. Considere o uso de tecnologia de anticorpos recombinantes se a reprodutibilidade for uma preocupação principal.

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