Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Smad4 [Validado por KO] para WB, IHC-P, IP, ELISA, ChIP, CUT&Tag - Q13485

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do SMAD4

• O membro 4 da família SMAD (SMAD4), também conhecido como DPC4, MADH4 e co-SMAD, é um mediador central das vias de transdução de sinal TGF-beta e BMP.
• O SMAD comum (co-SMAD) atua como coativador e mediador da sinalização TGF-beta. Ele forma um complexo heterotrimérico com SMAD2/SMAD3 no núcleo, que é necessário para a regulação transcricional mediada por TGF-beta. Referências relacionadas: PMID:25514493
• Na fisiologia muscular, o SMAD4 equilibra atrofia e hipertrofia: recrutado pela MSTN, ele promove a atrofia via SMAD2/4 fosforilado; com a diminuição da MSTN, o SMAD4 muda para a via BMP para promover a hipertrofia via SMAD1/5/8.
• Atua em sinergia com SMAD1 e YY1 na expressão gênica cardíaca específica mediada por BMP, ligando-se aos elementos de ligação a SMAD (SBEs) dentro dos elementos de resposta a BMP (BMPRE) de regiões ativadoras cardíacas.
• É componente do complexo SMAD3/SMAD4/JUN/FOS no sítio do promotor AP1, necessário para a atividade transcricional sinérgica de TGF-beta.
• Pode atuar como supressor tumoral; originalmente identificado como alvo de deleção no carcinoma pancreático 4 (DPC4), o que o implica na biologia do câncer.
• A localização subcelular é predominantemente citoplasmática, mas transloca para o núcleo após ativação do receptor, o que é consistente com seu papel na transdução de sinal.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Para Western blot (WB), é esperada uma banda de aproximadamente 60 kDa; considere utilizar condições redutoras e valide com lisados de controle positivos (por exemplo, HeLa, HEK293) e de knockout (KO) apropriados.
• Em imunohistoquímica (IHC-P), recomenda-se a recuperação de antígeno e a titulação do anticorpo; inclua controles de isotipo e verifique a coloração em seções de tecido relevantes.
• Para imunoprecipitação (IP), protocolos padrão com esferas de Proteína A/G são adequados; confira a co-imunoprecipitação dos parceiros de interação do SMAD (por exemplo, SMAD2/3).
• Ao realizar ChIP ou CUT&Tag, o epitopo (aa320-552) reside na região C-terminal; garanta a acessibilidade da cromatina e otimize a concentração do anticorpo para cada ensaio.
• A detecção baseada em ELISA pode ser desenvolvida usando este anticorpo como captura ou detecção, mas são necessárias titulações de checkerboard empíricas para determinar as concentrações de trabalho ideais.

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