Anticorpo Policlonal Anti-SMPD1 / ASM para WB, IF/ICC, ELISA - P17405

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da SMPD1 / ASM

• Codificada pelo gene SMPD1, a esfingomielinase ácida (aSMase) é uma esfingomielina fosfodiesterase que catalisa a conversão de esfingomielina em ceramida. Referências relacionadas: PMID:12563314, PMID:1840600, PMID:18815062

• A enzima existe em duas formas derivadas de um único precursor via tráfego alternativo: uma direcionada ao compartimento endolisossômico e a outra liberada extracelularmente; sob condições de estresse, a exocitose lisossômica torna-se uma fonte importante da forma secretada. Referências relacionadas: PMID:20807762, PMID:21098024, PMID:9660788, PMID:12563314, PMID:20530211

• Dentro dos lisossomos, a aSMase converte esfingomielina em ceramida, desempenhando um papel crítico na exportação de colesterol a partir de membranas intraendolisossômicas e exibindo atividade de fosfolipase C em relação à 1,2-diacilglicerol-fosfocolina e 1,2-diacilglicerol-fosfoglicerol; também modula a apoptose induzida por estresse via produção de ceramida. Referências relacionadas: PMID:20807762, PMID:21098024, PMID:25339683, PMID:8706124

• A forma secretada reorganiza a arquitetura da membrana plasmática gerando ceramida, influenciando assim a sinalização celular e a defesa do hospedeiro; sua secreção é regulada positivamente por estresse e mediadores inflamatórios como IL1B, IFNG e TNF. Referências relacionadas: PMID:12563314, PMID:17303575, PMID:20807762, PMID:9393854

• Em células feridas, a forma lisossômica é liberada extracelularmente de maneira dependente de Ca(2+), promovendo a endocitose e o reparo da membrana plasmática; uma forma clivada por CASP7 mostra atividade aumentada, apoiando ainda mais o reparo da membrana. Referências relacionadas: PMID:20530211

• A enzima é subvertida por vários patógenos: infecções bacterianas (por exemplo, P. aeruginosa, N. gonorrhoeae) e virais (por exemplo, SARS-CoV, SARS-CoV-2, vírus Ebola do Zaire) desencadeiam sua secreção, facilitando a entrada do patógeno via plataformas de membrana enriquecidas com ceramida.

• Mutações no SMPD1 levam às doenças de Niemann-Pick tipos A e B, caracterizadas pelo acúmulo de esfingomielina e neurodegeneração; a proteína localiza-se nos lisossomos, gotículas lipídicas e é secretada no espaço extracelular.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende os aminoácidos 70-340, cobrindo uma grande parte do domínio catalítico; espera-se, portanto, que o anticorpo reconheça tanto a forma precursora quanto a forma madura da aSMase.
• Para Western blotting, prevê-se uma banda em torno de 70 kDa; no entanto, a glicosilação e o processamento podem produzir múltiplas formas, portanto, valide no sistema de amostra relevante.
• Em aplicações de imunofluorescência e imunocitoquímica, considere a localização dupla da aSMase (lisossomos e secretada); recomenda-se fixação e permeabilização apropriadas.
• As aplicações de ELISA podem ser otimizadas usando aSMase recombinante como padrão; a reatividade cruzada com ortólogos de camundongo e rato permite estudos multiespécies.

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