Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-SMPD1 (Validado por KO) para WB, IF-F, IHC-P, ELISA - P17405

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de SMPD1

• SMPD1 codifica a esfingomielina fosfodiesterase, também conhecida como esfingomielinase ácida (aSMase). O splicing alternativo produz isoformas; a proteína existe sob duas formas enzimáticas decorrentes do tráfego alternativo: uma endolisossomal e a outra secretada. Referências relacionadas: PMID:20807762 PMID:21098024 PMID:9660788
• Nos lisossomas, a aSMase converte esfingomielina em ceramida, desempenhando um papel crítico na exportação de colesterol a partir de membranas intraendolisossomais e exibindo atividades de fosfolipase C. Referências relacionadas: PMID:20807762 PMID:21098024 PMID:25339683
• Modula a apoptose induzida por stress através da produção de ceramida. Referências relacionadas: PMID:8706124
• A aSMase secretada reorganiza a membrana plasmática convertendo esfingomielina em ceramida, e a sua secreção é regulada positivamente por mediadores inflamatórios e patógenos, facilitando a defesa do hospedeiro e a internalização de patógenos. Referências relacionadas: PMID:12563314 PMID:17303575 PMID:20807762 PMID:9393854
• Durante a infeção bacteriana, a forma lisossomal é libertada extracelularmente e clivada por CASP7, promovendo a reparação da membrana plasmática e contrariando os poros de perforina de GSDMD. Referências relacionadas: PMID:21157428
• A localização subcelular inclui lisossomas, gotículas lipídicas e secreção para o espaço extracelular.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação, fosforilação e formação de ligações dissulfureto; a enzima é dependente de zinco (ligação a metal).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O anticorpo é produzido contra um fragmento recombinante que abrange os aminoácidos 70–340 de SMPD1 humano, o que pode reconhecer epítopos no domínio catalítico. Considere validar a especificidade utilizando lisados celulares knockout (KO), quando disponíveis.
• Para Western blotting (WB), utilize condições redutoras e espere uma banda a aproximadamente 70 kDa. O enriquecimento lisossomal ou o tratamento com agentes de stress podem potenciar a deteção.
• Na imunofluorescência (IF-F) e na imuno-histoquímica (IHC-P), recomendam-se a permeabilização e a recuperação de antigénio. A co-marcação com marcadores lisossomais pode confirmar a localização subcelular.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser utilizado como parte de um par correspondente; titule e otimize as condições para o formato específico do seu ensaio.
• A reatividade cruzada é reportada para humano e rato; para outras espécies, a validação é aconselhada.

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