Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-SQSTM1 para WB, ELISA - Q64337

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do SQSTM1

• O SQSTM1, também conhecido como sequestossoma-1 ou p62, é uma proteína adaptadora citoplasmática indutível por estresse que atua como um receptor de autofagia seletiva, ligando agregados de proteínas ubiquitinadas à maquinaria autofágica.
• Reconhecimento de carga autofágica: Como um receptor de autofagia seletiva, o SQSTM1 faz a ponte entre a carga ubiquitinada e os autofagossomas. Ele sofre separação de fase líquido-líquido ao ligar-se a proteínas ubiquitinadas através do seu domínio UBA, formando corpos p62 que são então recrutados para os autofagossomas através da interação do seu motivo LIR com proteínas da família ATG8, levando à degradação autofágica da carga. Referências relacionadas: PMID:25723488, PMID:33397898
• Sinalização citoprotetora: O SQSTM1 interage com o KEAP1, sequestrando-o em corpos de inclusão e, assim, impedindo a degradação mediada pelo KEAP1 do NFE2L2/NRF2. Isso leva ao acúmulo nuclear do NRF2 e à expressão de genes antioxidantes e citoprotetores. Referências relacionadas: PMID:20173742, PMID:20421418, PMID:24011591
• Regulação da via NF-kappa-B: O SQSTM1 atua como um adaptador mediando a interação entre o TRAF6 e o CYLD, influenciando assim a ativação do NF-kappa-B em resposta a citocinas como TNF, NGF e interleucina-1. Referências relacionadas: PMID:14960283, PMID:18382763
• Localização subcelular: O SQSTM1 localiza-se em agregados citoplasmáticos (corpos p62), autofagossomas, endossomas tardios, lisossomos e no núcleo (corpos PML). Também é encontrado no retículo endoplasmático e nos sarcômeros das miofibrilas, refletindo suas diversas funções no controle de qualidade de proteínas e sinalização.
• Modificações pós-traducionais e características estruturais: A proteína está sujeita a acetilação, fosforilação, ubiquitinação e palmitoilação, e contém domínios de dedo de zinco. Essas modificações regulam sua atividade, localização e estabilidade.
• Distribuição tecidual: O SQSTM1 é amplamente expresso nos tecidos, consistente com seus papéis fundamentais na homeostase celular e respostas ao estresse.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 250-350 do SQSTM1 de camundongo, uma região que pode incluir partes do domínio PB1 e sequências ligadoras. A natureza policlonal deste anticorpo pode reconhecer múltiplos epítopos, fornecendo um sinal robusto no Western blot (WB).
• Para WB, espera-se uma banda próxima a 48 kDa, mas devido à tendência do SQSTM1 de formar agregados e sofrer modificações pós-traducionais, espécies de peso molecular mais alto também podem aparecer. Para minimizar a agregação, aqueça as amostras em tampão de carregamento redutor antes da eletroforese.
• Para ELISA, considere o uso da proteína recombinante SQSTM1 ou do peptídeo imunizante como antígeno de revestimento. A titulação tanto do anticorpo quanto do antígeno é recomendada para uma relação ideal sinal-ruído.
• A reatividade cruzada com humano, camundongo e rato é suportada pela homologia de sequência; no entanto, sugere-se a validação individual na amostra e aplicação específicas.

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