Anti-STIM1 Rabbit PolymAb® para WB, IHC-P, IP, ELISA - Q13586

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do STIM1

• O STIM1 atua como um sensor de Ca²⁺ que regula dois principais canais de Ca²⁺ retificadores para dentro na membrana plasmática: os canais de Ca²⁺ ativados por liberação (CRAC) e os canais seletivos de Ca²⁺ regulados por araquidonato (ARC), desempenhando um papel central na homeostase do cálcio. Referências relacionadas: PMID:15866891 PMID:16005298 PMID:16208375

• Após o esgotamento das reservas de Ca²⁺ do retículo endoplasmático (RE), o STIM1 oligomeriza e transloca da membrana do RE para as junções RE-membrana plasmática, onde ativa diretamente as subunidades do canal CRAC ORAI1, ORAI2 e ORAI3 para gerar entrada sustentada e oscilatória de Ca²⁺. Referências relacionadas: PMID:16537481 PMID:32415068

• O STIM1 está envolvido na formação do esmalte dentário, destacando seu papel em processos de calcificação específicos de tecidos. Referências relacionadas: PMID:24621671

• A proteína regula negativamente a resposta de interferon tipo I, retendo o adaptador de sinalização STING no retículo endoplasmático, impedindo assim sua ativação e a sinalização imune subsequente. Referências relacionadas: PMID:30643259

• O STIM1 é expresso de forma ubíqua em várias células primárias humanas e linhas celulares tumorais, sublinhando seu papel fundamental na fisiologia celular.

• Subcelularmente, o STIM1 está localizado na membrana celular, membrana do retículo endoplasmático, citoplasma, citoesqueleto e retículo sarcoplasmático, consistente com sua função dinâmica de translocação.

• Modificações pós-traducionais incluem glicosilação ligada a N e fosforilação, que podem regular sua estabilidade e atividade. A proteína contém um peptídeo sinal, uma única hélice transmembrana e um domínio citoplasmático de alça enrolada (coiled-coil).

• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, que podem apresentar expressão tecido-específica ou propriedades funcionais distintas.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 530–685, uma região dentro do segmento C-terminal citoplasmático do STIM1. Este desenho pode favorecer a detecção da proteína de comprimento total e certas variantes de splicing, mas pode não detectar isoformas que não possuem esta região. Valide em sua linha celular ou tecido alvo.

• Para Western blotting, espera-se uma banda predominante próxima a 77 kDa, embora bandas adicionais possam aparecer devido a glicosilação ou splicing alternativo. Use controles de carga apropriados e confirme a especificidade com controles negativos (por exemplo, knockdown por siRNA ou knockout por CRISPR, se disponível).

• Na imuno-histoquímica (IHC-P), o método de recuperação de antígeno e a diluição do anticorpo precisam de otimização, pois a localização intracelular do STIM1 pode exigir permeabilização. Inclua controles de isotipo apropriados e valide a coloração com tecidos positivos e negativos conhecidos.

• Para imunoprecipitação (IP), pré-incube o anticorpo com contas de proteína A/G para captura eficiente e considere a reticulação (cross-linking) para evitar interferência das cadeias pesada/leve no WB subsequente. Confirme a co-precipitação de parceiros de interação conhecidos, como o ORAI1.

• Para ELISA, titule o anticorpo contra o imunógeno ou lisado celular para determinar as condições ótimas de revestimento e detecção. Combine com um anticorpo de detecção correspondente ou um secundário conjugado para configurações de ELISA sanduíche.

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