Anticorpo Monoclonal Anti-SUPT5H/SPT5 para WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - O00267

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de SUPT5H/SPT5

• SPT5 (SUPT5H) é a subunidade maior do complexo fator indutor de sensibilidade a DRB (DSIF), que regula o processamento de mRNA e o alongamento da transcrição pela RNA polimerase II.
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• DSIF regula positivamente a capagem do mRNA ao estimular a atividade de mRNA guanililtransferase de RNGTT/CAP1A.
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• DSIF coopera com o complexo fator negativo de alongamento (NELF) para aumentar a pausa transcricional em sítios próximos ao promotor, facilitando a montagem de um complexo de RNA polimerase II competente para o alongamento.
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• DSIF e NELF promovem a pausa ao inibir o fator de alongamento da transcrição TFIIS/S-II, que estimula a atividade nuclease intrínseca da RNA polimerase II para clivar transcritos bloqueados, promovendo a retomada da transcrição.
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• Após fosforilação pela CDK9, o DSIF pode se transformar em um fator de alongamento positivo, possibilitando o alongamento transcricional produtivo.
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• SPT5 é essencial para a ativação transcricional mediada por Tat do HIV-1, suprimindo a pausa e evitando a terminação prematura dos transcritos virais.
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• SPT5 localiza-se predominantemente no núcleo e é expresso de forma ubíqua em todos os tecidos.

• SPT5 sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, metilação e ubiquitinação, refletindo sua regulação dinâmica na transcrição.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno foi projetado a partir de um peptídeo sintético dentro dos aminoácidos 800–900 de SPT5 humano (região C-terminal). Esta região é provavelmente conservada entre humano, camundongo e rato, o que é consistente com a reatividade cruzada relatada.
• Para Western blotting (WB), o SPT5 endógeno é detectado em aproximadamente 121 kDa. Considere o uso de lisados enriquecidos em fração nuclear para melhorar o sinal, devido à sua localização nuclear.
• Em ensaios de imunoprecipitação (IP), o desempenho do anticorpo pode depender da acessibilidade do epítopo; valide no sistema de amostra relevante.
• Para imunocitoquímica (IF/ICC) e imuno-histoquímica (IHC-P), espera-se coloração nuclear. Procedimentos adequados de permeabilização e recuperação de antígeno podem ser necessários para resultados otimizados.
• Para aplicações em ELISA, recomenda-se o pareamento com anticorpos de captura/detecção direcionados a epítopos não sobrepostos para garantir a especificidade.
• Realize a titulação do anticorpo nas condições específicas do seu ensaio, pois as concentrações de trabalho ideais podem variar dependendo do tipo de amostra e do método de detecção.

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