Anticorpo Monoclonal Anti-TDP-43/TARDBP para WB, IP, IF, IHC, ChIP - Q13148

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do TDP-43

• A proteína TAR de ligação ao DNA de 43 kDa (TDP-43) é codificada pelo gene TARDBP e também é conhecida como ALS10. Pertence à família hnRNP e contém dois motivos de reconhecimento de RNA (RRMs) e um domínio C-terminal rico em glicina.
• Atua como uma proteína de ligação ao RNA envolvida em múltiplas etapas da biogênese e processamento do RNA (PubMed:23519609). Referências relacionadas: PMID:23519609
• Liga-se preferencialmente a repetições GU através dos seus RRMs, localizando-se em íntrons longos e 3'UTRs de mRNAs, regulando assim o splicing de muitos RNAs, incluindo aqueles críticos para a sobrevivência neuronal e a neurodegeneração (PubMed:23519609, PubMed:24240615, PubMed:24464995, PubMed:21358640, PubMed:29438978). Referências relacionadas: PMID:23519609, PMID:24240615, PMID:24464995, PMID:21358640, PMID:29438978
• Desempenha um papel na manutenção da homeostase mitocondrial ao processar transcritos mitocondriais (PubMed:28794432) e regula a estabilidade do mRNA ao recrutar desadenilase para o 3'UTR (PubMed:30520513). Referências relacionadas: PMID:28794432, PMID:30520513
• Em resposta ao estresse oxidativo, associa-se a grânulos de estresse e ribossomos parados para promover a sobrevivência celular (PubMed:19765185, PubMed:23398327). Referências relacionadas: PMID:19765185, PMID:23398327
• Localiza-se no núcleo, citoplasma, grânulos de estresse e mitocôndrias. É expresso ubiquitariamente, com níveis particularmente elevados no pâncreas, placenta, pulmão, trato genital e baço.
• Sofre modificações pós-traducionais incluindo fosforilação, metilação e ubiquitinação, que regulam sua função e tendência à agregação. Mutações e deslocalização estão ligadas à esclerose lateral amiotrófica (ELA) e à degeneração lobar frontotemporal (DLFT).

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno tem como alvo a região C-terminal (aa 300–400) do TDP-43 humano, que pode reconhecer tanto a forma completa quanto a clivada; leve isso em consideração ao interpretar os padrões de bandas no Western blot.
• Para Western blot, espera-se uma banda predominante próxima a 45 kDa; use controles positivos adequados, como lisados de tecido cerebral ou HeLa, e valide no seu sistema de amostras.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato já foi documentada; confirme o desempenho nas suas configurações experimentais, especialmente para imuno-histoquímica, onde a fixação e a recuperação de antígeno podem afetar a coloração.
• Na imuno-histoquímica (IHC), otimize a recuperação de antígeno (por exemplo, tampão de citrato pH 6,0 ou EDTA pH 9,0) e as condições de detecção para cada tipo de tecido.
• Para imunoprecipitação (IP) e imunoprecipitação de cromatina (ChIP), verifique a adequação do anticorpo para a ligação à proteína nativa; observe que o TDP-43 é principalmente uma proteína de ligação ao RNA, e as interações com o DNA podem exigir otimização da reticulação.
• Este anticorpo já foi utilizado em ELISA; no entanto, condições individuais do ensaio (por exemplo, tampão de revestimento, agente de bloqueio) devem ser otimizadas para alcançar a sensibilidade desejada.

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