Anticorpo Policlonais de Coelho Anti-TFAM para WB, IF/ICC, ELISA - Q00059

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do TFAM

• TFAM (Fator de Transcrição A, Mitocondrial), também conhecido como MtTF1, TCF-6 e TCF6L2, é um fator de transcrição mitocondrial codificado no núcleo fundamental que regula a expressão do gene mitocondrial.
• Ele forma o complexo de iniciação da transcrição mitocondrial com TFB2M e POLRMT, essencial para a transcrição basal do DNA mitocondrial (mtDNA).
  Referências relacionadas: PMID:29149603
• TFAM se liga aos promotores da fita leve e HSP1, dobrando o DNA em uma curva em U através de seus domínios caixa HMG para recrutar POLRMT e facilitar a iniciação da transcrição.
  Referências relacionadas: PMID:22037172, PMID:1737790
• Além da transcrição, TFAM é fundamental para a manutenção e empacotamento do mtDNA; ele compacta o mtDNA em nucleoides e sua dosagem regula estritamente o número de cópias do mtDNA.
  Referências relacionadas: PMID:19304746, PMID:22841477, PMID:22037171
• Em cooperação com TFB2M, TFAM permite a abertura do promotor e a captura da fita não molde do DNA, uma etapa crucial para uma transcrição precisa.
  Referências relacionadas: PMID:20410300
• TFAM se localiza na matriz mitocondrial e nos nucleoides, onde também desempenha um papel no desenrolamento e organização do mtDNA.
• Ele sofre splicing alternativo e fosforilação; variantes associadas a doenças estão ligadas a distúrbios mitocondriais primários.
• Como membro da família HMGB, TFAM usa suas caixas HMG em tandem para ligar, dobrar e formar loops no mtDNA, contribuindo para a arquitetura do nucleoide.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal 1–220 do TFAM humano, que inclui os domínios caixa HMG em tandem; portanto, espera-se que o anticorpo reconheça o TFAM de comprimento total.
• Para Western blotting, considere usar lisados enriquecidos em mitocôndrias para detecção ideal; o peso molecular previsto é de ~29 kDa, mas modificações pós-traducionais podem causar um deslocamento.
• Para imunofluorescência/IF e ICC, antecipe um padrão de coloração pontilhada mitocondrial; recomenda-se a co-coloração com um marcador mitocondrial para confirmar a localização.
• Ao realizar o ELISA, titule o anticorpo contra TFAM recombinante ou lisados celulares para estabelecer as diluições de trabalho ideais.
• Devido à alta conservação da sequência entre humano, camundongo e rato, a reatividade cruzada é provável, mas valide o anticorpo no seu sistema de modelo.

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