Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-TNF-α para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P01375

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do TNF-α

• O TNF-α é uma citocina homotrimérica que existe tanto como um precursor transmembrana do tipo II de 26 kDa quanto como uma forma solúvel de 17 kDa gerada por clivagem proteolítica. Sua estrutura inclui um domínio intracelular, uma única hélice transmembrana e um domínio extracelular de ligação ao receptor na extremidade C.
• Codificado pelo gene TNF (apelido TNFA, TNFSF2) no cromossomo 6 humano, o TNF-α é um membro prototípico da superfamília do fator de necrose tumoral, que compreende 19 ligantes que regulam diversos processos biológicos.
• O TNF-α sinaliza principalmente através de dois receptores, TNFRSF1A/TNFR1 e TNFRSF1B/TNFBR. É secretado principalmente por macrófagos ativados e exerce efeitos pleiotrópicos, incluindo a indução de apoptose em certas linhagens de células tumorais, febre (pirogenicidade) e caquexia.
• Na artrite reumatoide, o TNF-α prejudica a função das células T reguladoras (Treg) através da upregulation da fosfatase de proteína 1 (PP1), que desfosforila o resíduo Ser-418 chave da FOXP3, causando disfunção das Treg. Referências relacionadas: PMID:23396208
• O TNF-α atua como um mediador chave da morte celular na ação anticâncer de neutrófilos estimulados por BCG combinados com um mimético de DIABLO/SMAC, demonstrado na linhagem de células de câncer de bexiga RT4v6. Referências relacionadas: PMID:16829952, PMID:22517918, PMID:23396208
• Sinergicamente com IL-1B e IL-6, o TNF-α induz a produção de VEGF, promovendo assim a angiogênese. Referências relacionadas: PMID:12794819
• A localização subcelular é dinâmica: a proteína de comprimento total reside na membrana celular, enquanto o ectodomínio clivado é secretado. O domínio intracelular (ICD) pode translocar para o núcleo e estimular a produção de IL-12 em células dendríticas.
• Modificações pós-traducionais incluem glicosilação, miristoilação, fosforilação e formação de ligações dissulfeto, todas críticas para o dobramento adequado, atividade e estabilidade.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região C-terminal (aa 134–233) do TNF-α humano, que se encontra na porção madura e secretada. O anticorpo policlonal resultante pode reconhecer tanto a forma ligada à membrana quanto a forma solúvel da citocina.
• Para western blotting, uma banda em aproximadamente 26 kDa representa o precursor transmembrana de comprimento total, enquanto uma banda em ~17 kDa indica a forma solúvel liberada. Use lisados de macrófagos ou monócitos estimulados por LPS como controles positivos.
• Em imuno-histoquímica, as seções embebidas em parafina podem exigir recuperação de antígeno mediada por calor. Considere testar tecidos conhecidos por serem ricos em TNF-α, como linfonodos inflamados ou sinóvia reumatoide.
• Ao aplicar imunofluorescência ou ELISA, valide a especificidade do anticorpo usando TNF-α recombinante ou linhagens celulares positivas/negativas relevantes que expressem o alvo.

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