Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-TriMetil-Histona H3-K9 (Q16695/P68431) para Epigenética

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

• Função: A histona H3 é um componente central do nucleossomo, enrolando e compactando o DNA em cromatina para regular a transcrição, reparo de DNA, replicação e estabilidade cromossômica. Modificações pós-traducionais de histonas, conhecidas como código de histonas, modulam a estrutura da cromatina e a expressão gênica.
• Localização Subcelular: Predominantemente localizada no núcleo e associada aos cromossomos durante todo o ciclo celular.
• Especificidade Tecidual: A variante de histona H3 H3.1t (Q16695) é expressa especificamente em células testiculares, enquanto a H3.1 canônica (P68431) é expressa ubiquamente nos tecidos.
• Modificações Pós-Traducionais: A histona H3 está sujeita a uma vasta gama de modificações covalentes, sendo a lisina 9 um local regulador chave. A lisina 9 pode sofrer citrulinização (conversão de arginina em citrulina) PMID:15345777 PMID:16567635 e dimetilarginina simétrica. Além disso, a trimetilação da lisina 9 (H3K9me3) é uma marca de cromatina repressiva bem caracterizada. Este anticorpo detecta especificamente a histona H3 trimetilada na lisina 9. Referências relacionadas: PMID:15345777, PMID:16567635

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Design do Imunógeno: O anticorpo foi produzido contra um peptídeo trimetilado sintético que abrange a lisina 9 da histona H3 humana. Ao usar este anticorpo, considere validar sua especificidade testando contra peptídeo H3 não modificado ou peptídeos com modificações alternativas (por exemplo, monometil, dimetil, acetil) para confirmar a seletividade para o estado trimetilado.
• Western Blot (WB) e Dot Blot (DB): Para WB, use protocolos padrão de extração de histonas (extração ácida ou alto sal) para enriquecer proteínas básicas. Certifique-se de bloqueio adequado e diluição do anticorpo para minimizar a ligação inespecífica. Para DB, verifique a reatividade cruzada contra outras modificações de histonas, se necessário.
• Imunofluorescência/Imunocitoquímica (IF/ICC): Otimize as condições de permeabilização e fixação para preservar a morfologia nuclear e a acessibilidade do antígeno. A coloração conjunta com DAPI pode ajudar a confirmar a localização nuclear.
• ELISA: Use para triagem de alto rendimento; considere revestir as placas com peptídeos metilados sintéticos versus não metilados para avaliar a especificidade.
• Imunoprecipitação de Cromatina (ChIP, ChIP-seq) e CUT&Tag: Este anticorpo é adequado para enriquecimento baseado em ChIP de cromatina marcada com H3K9me3. ChIP de reticulação (X-ChIP) ou ChIP nativa (N-ChIP) podem ser usadas; valide com loci genômicos de controle positivos e negativos (por exemplo, heterocromatina versus promotores ativos). Para CUT&Tag, siga protocolos publicados para aplicações de baixa entrada ou célula única. Valide o anticorpo em seu sistema de amostra relevante antes de experimentos em grande escala.

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