Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Type S APL (PML/RARA) para WB, ELISA - P29590/P10276

Especificações e Parâmetros Essenciais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PML

• O PML atua como proteína de suporte dos corpos nucleares do PML (PML-NBs), envolvidos na supressão tumoral, regulação transcricional, apoptose, senescência, resposta a danos no DNA e defesa antiviral. Inibe a exportação nuclear de mRNA mediada por EIF4E ao reduzir a afinidade de EIF4E pelo cap 5' m7G dos mRNAs-alvo. Referências relacionadas: PMID:11500381 PMID:11575918 PMID:18391071
• A isoforma PML-4 regula de forma crucial a apoptose e a supressão do crescimento: ativa RB1, inibe AKT1 por meio de fosfatases, modula negativamente a via PI3K (inibindo MTOR e ativando PTEN) e regula positivamente p53 ao promover sua acetilação/fosforilação e bloquear a degradação mediada por MDM2.
• O PML-4 atua como repressor transcricional de TBX2 durante a senescência celular, requer um complexo RBL2/E2F4 funcional, regula o reparo de quebras de dupla fita no DNA por meio da interação com WRN, controla negativamente a telomerase ao se ligar a TERT e modula a localização nuclear de PER2 e o ritmo circadiano.
• As isoformas nucleares (PML-1 a PML-5) cooperam com SATB1 na remodelação local de alças de cromatina e na regulação da expressão gênica no locus MHC-I; o PML-2 é necessário para a transcrição eficiente de genes MHC II induzida por IFN-gama por meio da regulação de CIITA.
• O PML apresenta ampla atividade antiviral contra vírus de DNA e RNA por meio de diversos mecanismos específicos de isoforma, incluindo o sequestro de capsídeos virais, a inibição da síntese de mRNA/proteínas virais e a restrição dependente de SUMO das polimerases virais.
• Funciona como uma ligase E3 de SUMO-proteína, sendo as isoformas PML-3 e PML-6 as que apresentam a maior atividade de SUMOilação; realiza a SUMOilação de alvos virais e celulares, como a proteína IE1 de expressão imediata do HHV-5. Referências relacionadas: PMID:20972456 PMID:28250117
• Em termos subcelulares, o PML localiza-se no núcleo (nucleoplasma, corpos de PML, nucléolo), citoplasma, membrana do retículo endoplasmático e membrana do endossomo inicial; os PML-NBs são desestruturados na leucemia promielocítica aguda pela oncoproteína PML-RARA.
• O PML pertence à família de proteínas TRIM (TRIM19) e contém domínios RING finger, B-box e coiled-coil; o splicing alternativo origina múltiplas isoformas com funções biológicas e distribuições subcelulares distintas.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• A mistura de imunógenos composta por peptídeos C-terminais de PML e N-terminais de RARA foi desenvolvida para atingir a junção de fusão PML/RARA; considere que é possível haver reatividade com PML ou RARA do tipo selvagem, o que deve ser validado utilizando modelos celulares positivos e negativos para a fusão.
• Na realização de Western blot, podem surgir múltiplas bandas devido às isoformas de PML (~47–50 kDa) e às variantes de RARA (~62–97 kDa); a proteína de fusão PML-RARA pode migrar de maneira diferente, portanto utilize controles positivos adequados para APL (por exemplo, a linhagem celular NB4).
• O ELISA pode ser utilizado para triagem ou titulação; a proteína PML-RARA recombinante ou lisados celulares de amostras de pacientes com APL podem servir como controles positivos.
• Como anticorpo policlonal, pode oferecer detecção robusta, mas requer otimização cuidadosa do bloqueio e da diluição do anticorpo para minimizar o background inespecífico.
• O produto é enviado em bolsa de gelo; após o recebimento, armazene-o na temperatura recomendada para manter a estabilidade a longo prazo.

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