Anti-UBA1/7 Rabbit PolymAb® para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P22314 / P41226

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da UBA1/7

• A UBA1 (enzima ativadora de modificador semelhante à ubiquitina 1) é a principal enzima E1 que inicia a conjugação da ubiquitina, direcionando proteínas para degradação proteossomal (PubMed:1447181, PubMed:1606621, PubMed:33108101). Referências relacionadas: PMID:1447181 PMID:1606621 PMID:33108101
• Ela ativa a ubiquitina via adenilação dependente de ATP da sua glicina C-terminal, formando um intermediário tioéster ubiquitina-E1 essencial para a subsequente transferência E2/E3 (PubMed:1447181). Referências relacionadas: PMID:1447181
• A UBA1 desempenha um papel crítico na resposta ao dano no DNA, facilitando a formação de focos induzidos por radiação e recrutando proteínas de reparo como TP53BP1 e BRCA1 para os locais de dano (PubMed:22456334). Referências relacionadas: PMID:22456334
• A proteína localiza-se em múltiplos compartimentos subcelulares, incluindo o citoplasma, o núcleo e as mitocôndrias, consistente com as suas diversas funções.
• A UBA1 é expressa de forma ubíqua nos tecidos, com deteção confirmada em eritrócitos ao nível proteico.
• As modificações pós-traducionais da UBA1 incluem acetilação e fosforilação, e mutações no gene estão associadas a distúrbios neurodegenerativos e à síndrome VEXAS.
• A proteína UBA7 (enzima ativadora de modificador semelhante à ubiquitina 7) é uma enzima E1 relacionada com especificidade distinta para ISG15, mas partilha homologia estrutural com a UBA1, permitindo o reconhecimento cruzado por este anticorpo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O péptido imunogénico (aa959-1058 da UBA1) encontra-se numa região que partilha homologia significativa com a UBA7, explicando a dupla especificidade do alvo. Valide a especificidade usando controlos de knockdown ou knockout nas suas amostras.
• Na transferência de Western (WB), espere bandas predominantes em ~118 kDa para UBA1 e ~112 kDa para UBA7, com possíveis variações dependendo de modificações pós-traducionais ou isoformas de splicing.
• Para imunofluorescência (IF) e imuno-histoquímica (IHC), note que a UBA1 está distribuída no citoplasma, núcleo e mitocôndrias; otimize as condições de fixação e permeabilização para preservar o sinal nestes compartimentos.
• Para aplicações de ELISA, considere usar proteína UBA1 recombinante ou lisados celulares enriquecidos com o alvo como padrões, e realize testes de reatividade cruzada contra UBA7 para confirmar a deteção.
• Sendo um anticorpo monoclonal de coelho recombinante (Rabbit PolymAb®), este reagente oferece alta consistência de lote para lote; no entanto, as diluições de trabalho ideais devem ser determinadas empiricamente para cada ensaio e tipo de amostra.

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