Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Ubiquitina para WB, IHC-P, ELISA - P0CG47

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Poliubiquitina-B

• A poliubiquitina-B, codificada pelo gene UBB, é um precursor da ubiquitina que produz múltiplas unidades de ubiquitina após o processamento.
• A ubiquitina existe tanto covalentemente ligada a proteínas alvo (monoubiquitina ou cadeias de poliubiquitina) quanto livre (não ancorada); as cadeias de poliubiquitina são ligadas através de diferentes resíduos de Lisina (por exemplo, Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33, Lys-48, Lys-63) ou via a Met iniciadora, cada uma com funções celulares distintas.
• Cadeias de poliubiquitina ligadas a Lys-48 direcionam proteínas para degradação pelo proteassoma, enquanto cadeias ligadas a Lys-63 medeiam sinalização não degradativa, como endocitose, resposta a danos no DNA e ativação de NF-kappa-B.
• Outros tipos de ligação incluem: Lys-6 (reparo de DNA), Lys-11 (ERAD e regulação do ciclo celular), Lys-29 (resposta ao estresse proteotóxico e ciclo celular), Lys-33 (modificação de quinases) e cadeias lineares (sinalização celular).
• A poliubiquitina livre não ancorada também atua na ativação de proteínas quinases e nas vias de sinalização.
• A ubiquitina está predominantemente localizada no citoplasma e no núcleo, e também é encontrada na membrana externa mitocondrial.
• As modificações pós-traducionais da ubiquitina incluem fosforilação e ADP-ribosilação.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi gerado usando uma proteína de fusão recombinante que cobre a sequência completa da ubiquitina humana (aa 1-228), que inclui todos os resíduos chave para o reconhecimento das formas monomérica e poliubiquitina.
• Para Western blot (WB), o peso molecular previsto é de 26 kDa; no entanto, devido à conjugação da ubiquitina a vários alvos, pode ser observada uma gama de bandas em pesos moleculares mais altos, refletindo as proteínas poliubiquitinadas.
• Ao realizar imunohistoquímica (IHC-P), considere usar um método padrão de recuperação de antígeno e valide a especificidade da coloração com tecidos controles positivos e negativos apropriados.
• A reatividade do anticorpo com uma ampla gama de espécies (prevista) sugere epitopos conservados; verifique a reatividade cruzada no sistema experimental específico se estiver usando espécies diferentes de humano, camundongo ou rato.
• Para aplicações em ELISA, o imunógeno recombinante pode servir como controle positivo para estabelecer a sensibilidade e especificidade do ensaio.

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