Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Ubiquitina para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P0CG47

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Ubiquitina (Poliubiquitina-B)

• A Ubiquitina, codificada pelo gene UBB, é uma proteína altamente conservada de 76 aminoácidos que existe livre (não ancorada) ou covalentemente ligada a proteínas alvo através de uma ligação isopeptídica. Pode formar cadeias de poliubiquitina ligadas através de diferentes resíduos de lisina ou cadeias lineares via metionina iniciadora.
• As cadeias de poliubiquitina desempenham funções diversas: as cadeias ligadas por Lis48 direcionam proteínas para degradação pelo proteassoma; as cadeias ligadas por Lis63 estão envolvidas na endocitose, reparo de DNA e sinalização NF-kappa-B; outras ligações (Lis6, Lis11, Lis29, Lis33) regulam processos como reparo de DNA, ERAD, ciclo celular, resposta ao estresse proteotóxico e modificação de quinases.
• A proteína localiza-se no citoplasma, núcleo e membrana externa da mitocôndria, refletindo seus amplos papéis na homeostase celular e sinalização.
• A Ubiquitina está sujeita a várias modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação e ADP-ribosilação, e frequentemente forma ligações isopeptídicas durante a conjugação.
• Como membro da família de proteínas da ubiquitina, UBB representa um precursor de poliubiquitina que é processado em monômeros maduros de ubiquitina, garantindo um suprimento constante para as necessidades celulares.
• A conjugação da ubiquitina geralmente tem como alvo resíduos de lisina em substratos, embora raras conjugações a resíduos de cisteína ou serina tenham sido observadas, ampliando o escopo da sinalização por ubiquitina.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende os aminoácidos 1-100 da Ubiquitina humana, que cobre a proteína madura de comprimento total, portanto o anticorpo pode reconhecer a ubiquitina total. Considere usar controles apropriados para distinguir ubiquitina não ancorada das formas conjugadas em seus ensaios.
• Para Western blotting (WB), uma banda em torno de 26 kDa pode corresponder ao precursor da poliubiquitina-B, mas monômeros individuais de ubiquitina (~8,5 kDa) conjugados a alvos aparecerão como manchas de alto peso molecular. Otimize a preparação da amostra e as condições de detecção para resolver espécies poliubiquitinadas.
• Em IHC-P e IF/ICC, verifique a especificidade comparando padrões de coloração em tecidos/linhagens celulares positivos e negativos conhecidos, e inclua um ensaio de competição com peptídeo bloqueador, se disponível.
• Para aplicações de ELISA, certifique-se de que o imunógeno recombinante ou a ubiquitina purificada seja usada como padrão para validar a sensibilidade e linearidade em seu sistema de ensaio.

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