Anticorpo Policlonado de Coelho Anti-UFL1 para WB, IF/ICC, ELISA - O94874

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da UFL1

• A UFL1 atua como uma E3 ligase de proteínas que medeia a ufmilação — a ligação covalente do modificador semelhante à ubiquitina UFM1 a resíduos de lisina em proteínas alvo — desempenhando papéis fundamentais na reciclagem de ribossomos, resposta ao dano ao DNA, sinalização por interferon e reticulofagia (ER-fagia).
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• Como parte do complexo UREL, a UFL1 catalisa a mono-ufmilação da proteína RPL26/uL24 da subunidade ribossomal 60S, o que promove a reciclagem de ribossomos e sua liberação da membrana do retículo endoplasmático, tanto após a terminação normal da tradução quanto quando ocorre parada ribossomal durante a translocação cotranslacional.
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• A UFL1 promove a reticulofagia em resposta ao estresse do retículo endoplasmático ao ufmilar substratos como CYB5R3 e RPN1, direcionando-os para degradação lisossomal; esse processo é essencial para a hematopoiese, a morfogênese de vasos sanguíneos e as respostas inflamatórias.
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• Na resposta ao dano ao DNA, a UFL1 é recrutada para os locais de quebra dupla da fita e medeia a monoufmilação da histona H4, bem como a ufmilação da MRE11, conectando a via de ufmilação ao reparo do DNA.
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• A UFL1 atua como regulador negativo da ativação de células T ao mediar a ufmilação e estabilização do receptor de checkpoint imunológico PD-1, além de ufmilar a TP53/p53 para promover sua estabilidade.
  Referências relacionadas: PMID:38377992, PMID:32807901

• As modificações pós-traducionais da UFL1 incluem acetilação, metilação e fosforilação. A UFL1 é expressa de forma ubíqua, com níveis mais altos no fígado, e apresenta expressão reduzida em vários carcinomas hepatocelulares invasivos, como Hep-G2 e HLE.
  Referências relacionadas: PMID:20018847

• A UFL1 se localiza na membrana do retículo endoplasmático, citoplasma, citosol, núcleo e cromossomos, o que é consistente com seus diversos papéis na função ribossomal, controle de qualidade do RE e reparo do DNA.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno composto pelos aminoácidos 601–794 da UFL1 humana está localizado na região C-terminal, o que pode aumentar a especificidade pelo alvo; considere verificar a reatividade na sua matriz de amostra incluindo controles adequados.
• Para Western blotting (WB), é esperada uma banda principal de aproximadamente 90 kDa. Otimize o bloqueio e a diluição do anticorpo usando lisados de células humanas, de camundongo ou de rato com expressão conhecida de UFL1.
• Em imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), a UFL1 pode apresentar localização em múltiplos compartimentos (RE, citoplasma, núcleo). As condições de fixação e permeabilização devem ser otimizadas empiricamente para preservar o reconhecimento do epítopo.
• Para aplicações em ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção para UFL1 ou substratos ufmilados; valide a especificidade e sensibilidade do ensaio com padrões relevantes.
• Como anticorpo policlonado de coelho, ele reconhece múltiplos epítopos; considere sua utilidade potencial em imunoprecipitação ou outras técnicas após validação individual.

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