Anti-USP8 pAb de coelho para WB, IF/ICC, ELISA - P40818

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da USP8

• USP8, também conhecida como ubiquitina carboxi-terminal hidrolase 8, é uma enzima desubiquitinante que remove a ubiquitina conjugada de proteínas substrato, regulando assim a estabilidade e a renovação proteica.
• Ela hidrolisa cadeias de poliubiquitina ligadas tanto a Lys-48 quanto a Lys-63, e sua atividade catalítica é aumentada durante a fase M, ligando-a à regulação do ciclo celular (Palavras-chave: Ciclo celular, Fosfoproteína).
• USP8 desempenha um papel crítico na triagem endossomal e no tráfego de membrana ao controlar a dinâmica da ubiquitina nos endossomos precoces. Ela desubiquitina a EPS15 e mantém a estabilidade do ESCRT-0, preservando assim a morfologia do endossomo.
• Na sinalização por fatores de crescimento, USP8 remove a ubiquitina do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), modulando a degradação do receptor e a atividade da via MAPK a jusante.
• USP8 desubiquitina a BACE1, inibindo sua degradação lisossomal e afetando o processamento da proteína precursora de amiloide (APP) e a formação de beta-amiloide. Referências relacionadas: PMID:27302062
• Além disso, USP8 está envolvida na regulação da anergia de linfócitos T por meio da formação de complexo com RNF128 e OTUB1, e contribui para a biogênese do acrossomo durante a espermatogênese.
• Subcelularmente, USP8 se localiza no citoplasma, núcleo, membrana do endossomo e membrana celular, refletindo seus diversos papéis funcionais.
• Mutações em USP8 estão associadas à síndrome de Cushing e outros distúrbios, destacando sua importância clínica (Palavras-chave: Variante de doença, Síndrome de Cushing).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno cobre a região N-terminal (aa 1-270) da USP8 humana, que pode reconhecer múltiplas isoformas devido ao splicing alternativo. Verifique a especificidade da isoforma no seu sistema experimental.
• Para Western blot, espera-se uma banda principal em torno de 128 kDa em condições redutoras. Valide o peso molecular observado com controles conhecidos e considere o uso de um gel de baixa porcentagem para uma separação ideal de proteínas de alto peso molecular.
• Em IF/ICC, USP8 exibe localização subcelular dinâmica. Inclua etapas adequadas de permeabilização e bloqueio; recomenda-se a co-coloração com marcadores de organelas (por exemplo, EEA1 para endossomos precoces).
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção, mas as concentrações ideais devem ser determinadas empiricamente para cada formato de ensaio.
• Este anticorpo apresenta reatividade cruzada confirmada com USP8 de camundongo e rato. Ao trabalhar com modelos roedores, inclua sempre controles positivos e negativos correspondentes à espécie para confirmar a especificidade.

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