Anticorpo Monoclonal Anti-Vinculina para WB, IF-P, ELISA - P18206

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Vinculina

• A vinculina é uma proteína de ligação à actina altamente conservada que conecta integrinas e cadherinas ao citoesqueleto de actina, desempenhando papéis fundamentais tanto na adesão célula-matriz quanto na adesão célula-célula.
• Uma isoforma específica do músculo, conhecida como metavinculina (MV), surge a partir de splicing alternativo e contém um exon adicional; ela é expressa predominantemente no músculo cardíaco e esquelético.
• A vinculina se localiza nas adesões focais célula-matriz, nas junções de adesão célula-célulo, na região perinuclear e também em estruturas especializadas como ossomos e sarcolema.
• A proteína sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação e palmitoilação, que regulam sua ativação, interações proteicas e direcionamento à membrana.
• A vinculina atua como mecanosensor; mudanças conformacionais induzidas pela tensão expõem sítios de ligação crípticos para talina e F-actina, fortalecendo assim os complexos de adesão.
• Como componente chave do complexo cadherina-catenina, a vinculina modula a expressão superficial da E-caderina e potencializa a mecanossensação nas junções de adesão, impactando a morfogênese e a homeostase do tecido.
• Consistente com seus papéis essenciais na adesão e na mecanotransdução, mutações no gene VCL estão associadas à cardiomiopatia dilatada (CMD1W) e à cardiomiopatia hipertrófica (CMH15).
• Além disso, a vinculina participa da morfologia celular, migração e invasão, como evidenciado pelo seu recrutamento aos ossomos e sua influência na dinâmica dos lamellipódios.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente à região C-terminal (aa800-900) da vinculina humana; esta região é conservada entre humano, camundongo e rato, explicando a reatividade cruzada relatada.
• Para Western blotting, a vinculina migra com um peso molecular aparente de ~124 kDa; use porcentagens de gel apropriadas (ex: SDS-PAGE a 8%) e verifique a eficiência da transferência com coloração de proteína total.
• Em imunofluorescência (IF-P), considere condições de fixação e permeabilização que preservem a arquitetura das adesões focais e das junções de adesão (ex: 4% de PFA seguido de 0,1% de Triton X-100). A co-coloração com paxilina ou marcadores de F-actina pode confirmar a localização.
• Ao realizar ELISA, titule o anticorpo contra o peptídeo imunógeno e a proteína nativa para determinar as concentrações ótimas; a adsorção cruzada pode ser avaliada se for observado alto fundo em matrizes complexas.
• Como a vinculina é uma proteína ubiqua, a inclusão de controles de carga apropriados (ex: GAPDH, β-actina) é essencial para análises quantitativas.
• Para estudos envolvendo tecidos musculares, observe que o anticorpo pode reconhecer tanto a isoforma de vinculina quanto a de metavinculina; esta última corre ligeiramente mais alto, com aproximadamente 150 kDa.

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