Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-WIPI1 para WB, ELISA - Q5MNZ9

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da WIPI1

• Identidade e família proteica: WIPI1 (proteína 1 interagente com fosfoinositídeo de domínio de repetição WD), também referida como homóloga da proteína Atg18 ou WIPI 49 kDa, pertence à família WIPI de proteínas de repetição WD40 que interagem com fosfoinositídeos. Essas repetições são essenciais para suas funções de ligação lipídica e autofágica.
• Função central na autofagia: WIPI1 é um componente-chave da maquinaria de autofagia, responsável pela formação de autofagossomos que entregam carga citoplasmática aos lisossomos para degradação. Liga-se ao fosfatidilinositol 3-fosfato (PtdIns3P) e é recrutado para o retículo endoplasmático para nucleação da montagem do fagóforo (PubMed:15602573, PubMed:20114074, PubMed:20484055). Referências relacionadas:
  • PMID:15602573
  • PMID:20114074
  • PMID:20484055
• Posicionamento na via: Atuando a jusante de ULK1 e PI3-quinases, WIPI1 detecta PtdIns3P gerado nas membranas do RE. Em seguida, auxilia WIPI2 no recrutamento do complexo ATG12-ATG5-ATG16L1, que direciona diretamente o alongamento da membrana autofagossomal nascente. Esta função é crítica tanto para a autofagia induzida por privação e cálcio quanto para a mitofagia (PubMed:28561066). Referências relacionadas:
  • PMID:28561066
• Transferência lipídica e formação de complexos: Juntamente com WDR45/WIPI4, WIPI1 aumenta a associação das proteínas ATG2 (ATG2A ou ATG2B) com membranas ricas em PI3P, promovendo assim a transferência lipídica para a expansão do autofagossomo (PubMed:31271352). Referências relacionadas:
  • PMID:31271352
• Xenofagia e defesa antimicrobiana: WIPI1 participa da autofagia seletiva de patógenos, como Staphylococcus aureus, englobando bactérias em vesículas semelhantes a autofagossomos positivas para WIPI1 destinadas à destruição lisossomal (PubMed:22829830). Referências relacionadas:
  • PMID:22829830
• Funções não autofágicas: Além da autofagia canônica, WIPI1 regula a maturação do melanossomo e a transcrição de enzimas melanogênicas, um processo independente de vias induzidas por privação (PubMed:21317285). Também pode estar envolvida no tráfego do receptor de manose-6-fosfato (PubMed:15020712). Referências relacionadas:
  • PMID:21317285
  • PMID:15020712
• Distribuição tecidual e localização subcelular: WIPI1 é expressa de forma ubíqua, com níveis mais altos em músculo esquelético, coração, testículo, pâncreas e placenta, e é regulada positivamente em muitas linhagens de células tumorais. Localiza-se na rede trans-Golgi, endossomos, vesículas revestidas por clatrina e estruturas pré-autofagossômicas, além de associar-se ao citoesqueleto.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Desenho do imunógeno: O imunógeno abrange os aminoácidos 187-446 do WIPI1 humano, uma região contendo múltiplas repetições WD40. Esta porção central é conservada entre espécies, o que está alinhado com a reatividade cruzada observada com camundongo e rato.
• Western blotting (WB): Dada a alta expressão de WIPI1 em músculo, coração e testículo, lisados teciduais dessas fontes são provavelmente controles positivos adequados. O peso molecular previsto é ~49 kDa, mas bandas adicionais devido a splicing alternativo ou modificações pós-traducionais podem aparecer. É aconselhável incluir uma etapa de bloqueio e validar a especificidade usando controles de siRNA ou knockout.
• Aplicação em ELISA: Este anticorpo pode ser usado em formatos de ELISA indireto. Para o desenvolvimento de ELISA sanduíche, considere emparelhá-lo com um anticorpo monoclonal de captura específico para um epítopo não sobreposto. Valide com proteína WIPI1 recombinante (como o imunógeno) ou lisados celulares de células com alta expressão.
• Reatividade cruzada e consistência entre espécies: A reatividade cruzada relatada com humano, camundongo e rato implica que o(s) epítopo(s) reconhecido(s) são conservados. No entanto, recomenda-se Western blots piloto com lisados das três espécies para confirmar a reatividade e os padrões de bandas.

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