Anticorpo Policlonais Anti-WNK1 para WB, IF/ICC, ELISA - Q9H4A3

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da WNK1

• WNK1 é uma serina/treonina-proteína quinase que atua como componente crítico da cascata quinase WNK1-SPAK/OSR1, regulando a pressão arterial e a homeostase iônica. Sob estresse hiperosmótico, ela funciona como um sensor de aglomeração molecular, passando por separação de fase líquido-líquido para criar um compartimento sem membrana que concentra WNK1 com seus substratos OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK, promovendo sua fosforilação e ativação. Referências relacionadas: PMID:15883153, PMID:17190791, PMID:31656913, PMID:36318922
• OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK ativados fosforilam e ativam os co-transportadores Na-K-Cl (SLC12A1/NKCC2, SLC12A2/NKCC1) enquanto inibem os co-transportadores K-Cl (SLC12A5/KCC2, SLC12A6/KCC3), promovendo assim o influxo de íons e o aumento do volume regulatório. Referências relacionadas: PMID:16263722, PMID:21321328, PMID:19665974
• Além do transporte iônico, WNK1 regula a angiogênese em células endoteliais por meio da ativação da via SPAK/OSR1, contribuindo para a quimiotaxia e a proliferação. Referências relacionadas: PMID:25362046
• WNK1 fosforila substratos como PCF11 (que regula a exportação nuclear de mRNA) e NEDD4L, e atua como regulador negativo da autofagia. Ela também tem funções de scaffold independentes da atividade quinase, como a estabilização do complexo proteico da membrana do retículo endoplasmático e a regulação do ENaC por meio da ativação de SGK1. Referências relacionadas: PMID:29196535, PMID:27911840, PMID:33964204, PMID:36373794
• WNK1 é necessária para a abscisão mitótica e pode participar da reorganização do citoesqueleto de actina. Referências relacionadas: PMID:21220314, PMID:10660600
• É amplamente expressa, com níveis mais altos em testículo, coração, rim e músculo esquelético; uma isoforma específica do rim, sem atividade quinase, atua como regulador dominante-negativo da quinase de comprimento total. Subcelularmente, WNK1 se localiza no citoplasma, núcleo e fuso mitótico.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende os aminoácidos 1-210 do terminal N da WNK1 humana; essa região não se sobrepõe ao domínio quinase (resíduos 221–491), permitindo a detecção tanto da isoforma de comprimento completo quanto de possíveis isoformas sem atividade quinase.
• Para Western blot, observe o grande peso molecular previsto (~251 kDa); use um gel de SDS-PAGE de baixa porcentagem (por exemplo, 6%) e transferência úmida com tempo estendido para garantir uma transferência eficiente.
• Na imunofluorescência/imunocitoquímica, WNK1 se localiza no citoplasma, núcleo e fuso mitótico; a fixação e permeabilização adequadas devem ser validadas para o tipo celular específico e o compartimento de interesse.
• Como é um anticorpo policlonal, pode ocorrer variabilidade entre lotes; inclua controles positivos (por exemplo, HeLa, HEK293) e negativos em cada experimento para confirmar a reatividade.
• Para ELISA, considere um formato sanduíche com um anticorpo de captura validado se for necessária uma detecção quantitativa.

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