Anticorpo policlonal de coelho anti-WNK1 para WB e ELISA - Q9H4A3

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da WNK1

• A WNK1 (proteína quinase 1 deficiente em lisina) é uma serina/treonina-proteína quinase que atua como regulador principal da cascata de quinases WNK-SPAK/OSR1, controlando de forma crítica a atividade dos cotransportadores de íons e a pressão arterial sistêmica (PubMed:15883153, PubMed:17190791, PubMed:31656913).
  Referências relacionadas: PMID:15883153, PMID:17190791, PMID:31656913
• Sob estresse hiperosmótico, a WNK1 atua como sensor de aglomeração molecular, passando por separação de fases líquido-líquido para formar compartimentos sem membrana que concentram a WNK1 com seus substratos OXSR1/OSR1 e STK39/SPAK, aumentando assim a fosforilação a jusante e o aumento regulatório do volume (PubMed:36318922).
  Referências relacionadas: PMID:36318922
• Além de sua cascata quinase canônica, a WNK1 exerce funções dependentes de quinase na angiogênese ao ativar OXSR1/OSR1 para quimiotaxia e STK39/SPAK para a proliferação de células endoteliais (PubMed:25362046), além de fosforilar substratos adicionais, como SYT2, PCF11 e NEDD4L, regulando, respectivamente, a ligação de vesículas sinápticas, a exportação de mRNA (PubMed:29196535) e a estabilidade de proteínas de membrana.
  Referências relacionadas: PMID:25362046, PMID:29196535
• Uma isoforma específica do rim, com a quinase inativa, atua como regulador dominante-negativo da WNK1 de comprimento total, modulando o equilíbrio de sódio e potássio no néfron distal, enquanto as funções de suporte independentes de quinase da WNK1 controlam a localização na membrana de vários transportadores e canais, como SLC4A4, SLC26A6, TRPV4 e CFTR, e promovem a ativação de SGK1 por meio do recrutamento de mTORC2 (PubMed:14645531, PubMed:36373794).
  Referências relacionadas: PMID:14645531, PMID:36373794
• A WNK1 é amplamente expressa, com níveis mais elevados nos testículos, coração, rins e músculos esqueléticos, e apresenta presença específica nos gânglios da raiz dorsal e nos túbulos distais/de conexão dos rins, em concordância com seus papéis na nocicepção e na homeostase eletrolítica.
• Subcelularmente, a WNK1 está localizada no citoplasma, no núcleo e no fuso mitótico, e participa da reorganização do citoesqueleto de actina, da abscisão mitótica e da regulação negativa da autofagia (PubMed:10660600, PubMed:21220314, PubMed:27911840).
  Referências relacionadas: PMID:10660600, PMID:21220314, PMID:27911840
• As modificações pós-traducionais incluem fosforilação, ubiquitinação e glicosilação; a proteína também é sensível ao cloreto, e mutações estão associadas à neuropatia sensorial e autonômica hereditária tipo II (HSAN2) e ao pseudo-hipoaldosteronismo.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aa 1-210) da WNK1 humana, podendo reconhecer tanto as isoformas de comprimento total quanto as específicas do rim. Valide a detecção em lisados de células ou tecidos relevantes.
• Para Western blot, espera-se uma banda próxima de 250 kDa; entretanto, podem ser observadas múltiplas isoformas e possíveis produtos de clivagem. Considere o uso de inibidores de protease frescos e condições de transferência otimizadas para proteínas de alto peso molecular.
• As aplicações em ELISA podem se beneficiar do uso da proteína recombinante purificada ou do peptídeo como controle positivo para estabelecer a sensibilidade e a especificidade do ensaio.
• Foi relatada reatividade cruzada com camundongo e rato; verifique a reatividade na espécie de interesse com controles apropriados, como lisados de knockout ou peptídeo bloqueador, quando possível.
• Ao estudar a sinalização dependente de fosforilação, observe que este anticorpo policlonal não é específico para fosfo. Combine-o com anticorpos específicos para fosfo a fim de monitorar o estado de ativação da WNK1.

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