Anticorpo Monoclonal Anti-YTHDF2 (Validado por KO) para WB, IP, IF/ICC, ELISA - Q9Y5A9

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do YTHDF2

• O YTHDF2 liga-se especificamente a RNAs contendo N6-metiladenosina (m6A) e regula a sua estabilidade promovendo a degradação através de interações com o complexo deadenilase CCR4-NOT e com o complexo ribonuclease P/MRP. Referências relacionadas: PMID:24284625 PMID:26046440 PMID:26318451 PMID:27558897
• Os parálogos YTHDF (YTHDF1, YTHDF2 e YTHDF3) compartilham alvos de mRNA contendo m6A e atuam de forma redundante para mediar a degradação de mRNA e a diferenciação celular. Referências relacionadas: PMID:28106072 PMID:32492408
• Subcelularmente, o YTHDF2 localiza-se no citosol, nos corpos P (P-bodies), nos grânulos de estresse e pode translocar para o núcleo sob certas condições.
• O YTHDF2 promove a formação de compartimentos sem membrana separados por fase, como corpos P e grânulos de estresse, ao sofrer separação de fase líquido-líquido ao se ligar a mRNAs com múltiplos resíduos m6A. Referências relacionadas: PMID:31292544 PMID:31388144 PMID:31642031
• É necessário para a especificação de células-tronco hematopoiéticas, promovendo a degradação de mRNAs contendo m6A. Referências relacionadas: PMID:30065315
• O YTHDF2 regula o desenvolvimento neural inibindo a especificação neural através da degradação dependente de m6A de mRNAs específicos neurais. Referências relacionadas: PMID:32169943
• Regula a resposta imune inata ligando-se a transcritos de IFNB contendo m6A e promovendo a sua degradação, inibindo assim a produção de interferon do tipo I. Referências relacionadas: PMID:30559377
• Durante a infecção viral, o YTHDF2 liga-se a RNAs virais modificados por m6A para promover a expressão gênica viral e a replicação, conforme observado no SV40 e no herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi (KSHV). Referências relacionadas: PMID:29447282 PMID:29659627

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno (aminoácidos 339–565) abrange o domínio YTH crítico para o reconhecimento de m6A; para Western blot, considere o uso de linhagens celulares knockout para confirmar a especificidade da banda, pois este anticorpo foi validado por KO.
• Para imunoprecipitação (IP), o anticorpo pode ser adequado para enriquecer complexos endógenos YTHDF2–RNA; inclua controles negativos apropriados (por exemplo, IgG) para avaliar o ruído de fundo.
• Em imunofluorescência/ICC, o YTHDF2 geralmente aparece em focos citoplasmáticos (corpos P e grânulos de estresse) e pode se deslocar para o núcleo; otimize as condições de fixação/permeabilização para o seu tipo de célula e tratamento (por exemplo, grânulos de estresse induzidos por arsenito).
• Para ELISA, protocolos padrão de ELISA indireto com YTHDF2 recombinante ou lisados celulares podem ser empregados; valide na matriz de amostra relevante.

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