Anticorpo Monoclonal Anti-Humano TLR3 Conjugado com APC para Citometria de Fluxo - O15455

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do TLR3

• O receptor Toll-like 3 (TLR3), também conhecido como CD283, IIAE2 e IMD83, é uma proteína de membrana do tipo I de passagem única que pertence à família dos receptores Toll-like, caracterizada por repetições ricas em leucina (LRRs) no domínio extracelular e um domínio Toll/interleucina-1 (TIR) na cauda citoplasmática.
• O TLR3 é um componente chave da imunidade inata e adaptativa, funcionando como um receptor de reconhecimento de padrões que detecta RNA de fita dupla (dsRNA), uma marca molecular de infecção viral, desencadeando assim respostas imunes antivirais.
• Ao ligar-se ao dsRNA nos endossomos, o TLR3 sinaliza exclusivamente através da proteína adaptadora TRIF (TICAM1), que ativa os fatores de transcrição NF-kappa-B e IRF3, levando à produção de interferons do tipo I e citocinas pró-inflamatórias.
• A nível subcelular, o TLR3 localiza-se principalmente à membrana do retículo endoplasmático, à membrana do endossomo e aos endossomos precoces, posicionando-o para detectar o dsRNA viral libertado durante a acidificação endossomal.
• O TLR3 é altamente expresso na placenta e no pâncreas, e é proeminentemente encontrado em células dendríticas imaturas CD11c+; notavelmente, é o TLR mais fortemente expresso no cére cerebro, particularmente em astrócitos, glia e neurônios.
• A proteína sofre modificações pós-traducionais incluindo glicosilação, fosforilação e conjugação de ubiquitina, que regulam o seu tráfego e atividade de sinalização.
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, e mutações no gene TLR3 estão associadas à imunodeficiência e suscetibilidade à encefalite por herpes simplex.
• Com um peso molecular de aproximadamente 104 kDa, o TLR3 contém múltiplas ligações dissulfeto que estabilizam o seu ectodomínio LRR em forma de solenoide, essencial para o reconhecimento de ligantes.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região extracelular N-terminal (aminoácidos 24–339), que engloba vários módulos LRR; certifique-se de que o anticorpo reconhece a conformação nativa se for utilizado para coloração de superfície celular ou endossomal em condições não desnaturantes.
• Para citometria de fluxo intracelular (FC), é necessária permeabilização; teste protocolos de fixação e permeabilização (por exemplo, saponina ou Triton X-100) para otimizar a exposição do epítopo preservando a estabilidade do fluoróforo.
• A expressão do TLR3 é predominantemente intracelular em células em repouso; a estimulação com dsRNA ou infecção viral pode aumentar e redistribuir o recetor, por isso considere controlos positivos apropriados, como PBMCs tratados com pol(I:C) ou células dendríticas.
• A reatividade cruzada com outras espécies não é relatada; valide a deteção na matriz de amostra pretendida, especialmente dada a alta expressão de TLR3 em tecidos da placenta e do cérebro.
• O conjugado APC fornece um sinal brilhante para citometria de fluxo; use controlos de compensação apropriados e evite a exposição prolongada à luz para evitar o fotobranqueamento.

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