Anticorpo monoclonal APC anti-CD163 de camundongo para citometria de fluxo - Q2VLH6

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de CD163

• CD163, também conhecido como proteína M130 do receptor eliminador rico em cisteína do tipo 1, é um membro da superfamília de receptores eliminadores ricos em cisteína (SRCR). É expresso principalmente em monócitos e macrófagos maduros, incluindo células de Kupffer no fígado, macrófagos da polpa vermelha no baço e macrófagos dos linfonodos mesentéricos.
• A proteína atua na eliminação e endocitose de complexos de hemoglobina/haptoglobina (Hb/Hp) pelos macrófagos. Esse processo protege os tecidos contra danos oxidativos causados pela hemoglobina livre e facilita a reciclagem do ferro por meio da degradação do heme.
• A ligação de CD163 aos complexos Hb/Hp depende de cálcio e do pH. Após a ligação ao ligante, CD163 desencadeia cascatas de sinalização intracelular envolvendo mobilização de cálcio dependente de tirosina-quinase e produção de trifosfato de inositol, levando à secreção de IL-6 e CSF-1.
• Uma forma solúvel (sCD163) é gerada pela liberação do ectodomínio. Níveis elevados de sCD163 estão associados a condições inflamatórias, nas quais ele pode desempenhar um papel anti-inflamatório ao atuar como receptor chamariz.
• Estruturalmente, CD163 é uma proteína transmembrana de passagem única do tipo I, com um peptídeo-sinal, múltiplos domínios SRCR e uma cauda citoplasmática curta. É fortemente glicosilada e contém ligações dissulfeto, contribuindo para sua estabilidade e propriedades de ligação ao ligante.
• O gene humano CD163 está localizado no cromossomo 12p13.31, enquanto o ortólogo de camundongo está localizado no cromossomo 6. A proteína sofre splicing alternativo, produzindo variantes com possíveis diferenças funcionais.
• CD163 é reconhecido como um marcador da resposta de fase aguda; sua expressão é aumentada por estímulos anti-inflamatórios (por exemplo, glicocorticoides e IL-10) e reduzida por sinais pró-inflamatórios (por exemplo, LPS e TNF-α).

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Para citometria de fluxo, use o anticorpo APC diretamente conjugado. Faça uma titulação para determinar a concentração de trabalho ideal para seu tipo celular específico e suas condições experimentais, incluindo sempre um controle de isotipo apropriado.
• Este anticorpo tem como alvo os aminoácidos 39–260 do domínio extracelular, que é acessível na superfície celular. É adequado para marcação de células vivas sem permeabilização.
• Valide a reatividade em amostras de tecidos de camundongo relevantes que expressem CD163, como baço, fígado ou linfonodos. A digestão enzimática pode melhorar a recuperação de macrófagos para a marcação.
• Como a expressão de CD163 pode ser modulada, considere tratar as células com IL-10 ou glicocorticoides para aumentar a detecção in vitro caso os níveis de expressão sejam baixos.
• Use o bloqueio dos receptores Fc (por exemplo, anti-CD16/CD32) antes da marcação para minimizar a ligação não específica aos receptores Fc nos macrófagos.

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