Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Humano NT5E/CD73 Conjugado a APC para Citometria de Fluxo - P21589

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de NT5E/CD73

• Atividade enzimática central: NT5E/CD73 é uma 5'-nucleotidase que hidrolisa nucleosídeos monofosfatos extracelulares em nucleosídeos e fosfato inorgânico, com uma forte preferência por AMP em relação a outros substratos. Esta etapa é limitante da taxa na geração de adenosina imunossupressora a partir de ATP.
  Referências relacionadas:
  PMID:21933152 PMID:22997138 PMID:23142347 PMID:34403084
• Especificidade por substrato: Além do AMP, a enzima também pode atuar em IMP, UMP, GMP, CMP e vários desoxinucleotídeos (dAMP, dCMP, dTMP), bem como NAD e NMN, embora os monofosfatos de ribonucleotídeos sejam os substratos preferidos.
• Localização subcelular: A CD73 está anexada ao folheto externo da membrana plasmática por meio de uma âncora de glicosilfosfatidilinositol (GPI) C-terminal, posicionando seu sítio ativo no espaço extracelular para regular os pools de nucleotídeos pericelulares.
• Modificações pós-traducionais: A proteína é N-glicosilada e contém ligações dissulfeto estruturalmente importantes. Sua fixação à membrana depende inteiramente da âncora GPI.
• Características estruturais: Pertence à família das 5'-nucleotidases e requer zinco e outros íons metálicos divalentes para atividade catalítica. A molécula existe como um homodímero na superfície celular.
• Relevância em doenças: Mutações no gene NT5E estão associadas à calcificação arterial devido à deficiência de CD73 (ACDC), uma doença genética rara, e a proteína é um importante alvo de checkpoint imunológico em oncologia.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange todo o ectodomínio (aminoácidos 27–547), que inclui as regiões catalítica e de ligação ao substrato. Este design favorece o reconhecimento da CD73 nativa e corretamente dobrada em células vivas.
• Para citometria de fluxo, considere titular o anticorpo para determinar a concentração ótima de coloração para o seu tipo celular de interesse. Inclua controles de isotipo apropriados e corantes de viabilidade.
• A CD73 pode ser liberada (shedding) ou encontrada em vesículas extracelulares em alguns sistemas; garanta que o preparo da amostra minimize danos celulares para evitar sinais falso-negativos.
• Este conjugado APC é adequado para painéis multiplex; verifique as configurações de compensação ao combiná-lo com outros fluoróforos.

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