Anticorpo monoclonal de coelho anti-Ki67 humano/macaco conjugado com APC para citometria de fluxo intracelular - P46013

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do Ki67

• O Ki-67 atua como um repelente de cromossomos durante o início da mitose, impedindo o colapso dos cromossomos ao formar uma barreira estérica e de carga eletrostática na superfície cromossômica. Referências relacionadas: PMID:27362226
• Durante a anáfase mitótica, o Ki-67 passa a atuar como um atraente de cromossomos, promovendo o agrupamento cromossômico e excluindo partículas citoplasmáticas do futuro espaço nuclear. Referências relacionadas: PMID:32879492 PMID:39153474
• A desfosforilação durante a saída da mitose e a exposição de uma região básica conservada induzem a separação de fases líquido-líquido dependente de RNA, coalescendo as superfícies cromossômicas. Referências relacionadas: PMID:39153474 PMID:28935370
• O Ki-67 liga-se ao DNA, com preferência por DNA superenrolado e rico em AT. Referências relacionadas: PMID:10878551
• A localização subcelular inclui as superfícies cromossômicas, os nucléolos e o núcleo, em concordância com seu papel dinâmico durante o ciclo celular.
• A proteína sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação e ubiquitinação, que provavelmente regulam sua atividade e localização.
• O Ki-67 pode influenciar a organização da cromatina em níveis superiores, embora seu papel direto ainda esteja sob investigação. Referências relacionadas: PMID:24867636
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas do Ki-67, potencialmente modulando sua função em diferentes contextos celulares.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente aos aminoácidos 2271–2370 próximo à extremidade C-terminal; o anticorpo pode reconhecer tanto a proteína de comprimento total quanto isoformas resultantes de splicing que contenham esse epítopo.
• Para citometria de fluxo intracelular, otimize as etapas de fixação e permeabilização para garantir a acessibilidade do antígeno nuclear Ki-67.
• Use um controle de isotipo apropriado e valide em uma linhagem celular proliferativa (por exemplo, HeLa), utilizando um controle negativo de células em repouso para confirmar a especificidade.
• Devido ao grande tamanho da proteína (359 kDa), considere adquirir um número suficiente de eventos e utilizar configurações apropriadas de compensação de fluorescência.

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