Anticorpo Monoclonal de Coelho anti-TNF-α de Rato conjugado com APC para FC (intra) - P06804

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do TNF-α

• O fator de necrose tumoral (TNF-α) é uma citocina pró-inflamatória secretada principalmente por macrófagos ativados, pertencente à superfamília de ligantes do fator de necrose tumoral (TNFSF2). Também é conhecido como cachectina e é codificado pelo gene Tnf (nomes alternativos Tnfa, Tnfsf2).
• O TNF-α exerce seus efeitos biológicos ao se ligar a dois receptores distintos, TNFR1 (TNFRSF1A) e TNFR2 (TNFRSF1B), mediados uma ampla gama de respostas celulares, incluindo apoptose, sobrevivência celular e inflamação.
• Essa citocina é um mediador chave da resposta de fase aguda e pode atuar como pirogênio endógeno, induzindo febre diretamente ou por meio da estimulação da secreção de interleucina-1, e está implicada no desenvolvimento de caquexia em estados de doença crônica.
• No tecido adiposo, o TNF-α induz resistência à insulina ao inibir a fosforilação da tirosina de IRS1 induzida por insulina e a captação de glicose, além de promover a degradação da proteína GKAP42, contribuindo para a patogênese do diabetes tipo 2. Referências relacionadas: PMID:25586176
• O TNF-α desempenha um papel significativo no metabolismo ósseo ao promover a osteoclastogênese e, assim, mediar a reabsorção óssea, ligando a inflamação à perda óssea em condições como a artrite reumatoide. Referências relacionadas: PMID:32741026
• O domínio intracelular (ICD) do TNF-α, gerado por clivagem proteolítica, pode atuar como molécula de sinalização para induzir a produção de IL-12 em células dendríticas, destacando uma função independente de receptor.
• Subcelularmente, o TNF-α é sintetizado como uma proteína transmembrana do tipo II (26 kDa) na membrana celular e é clivado pela enzima conversora do TNF-α (TACE) para liberar a citocina solúvel de 17 kDa. A proteína sofre várias modificações pós-traducionais, incluindo glicosilação, fosforilação, miristoilação e formação de pontes dissulfeto.
• Além de seus papéis citotóxicos e inflamatórios, o TNF-α também estimula a angiogênese de forma sinérgica com IL-1β e IL-6, e em certas condições pode promover a proliferação e diferenciação celular, refletindo sua natureza pleiotrópica.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 80-235 do TNF-α de rato (NP_038721.1), cobrindo a região madura do TNF-α solúvel. Este design visa o domínio extracelular, podendo reconhecer tanto a forma ligada à membrana quanto a forma solúvel.
• Para citometria de fluxo intracelular, os protocolos de fixação e permeabilização são críticos. Considere usar um protocolo padrão de coloração intracelular com um kit de fixação/permeabilização adequado para citocinas.
• Como o TNF-α é uma proteína secretada, as células em repouso podem ter baixos níveis intracelulares. Para uma detecção robusta, estimule as células (por exemplo, com PMA/ionomicina ou LPS) na presença de um inibidor de transporte proteico (por exemplo, Brefeldina A ou Monensina) para acumular o TNF-α no aparelho de Golgi.
• Recomenda-se titular o anticorpo para determinar a concentração ideal para o seu sistema experimental específico, começando com uma faixa de 0,5-5 µg por milhão de células.
• Execute controles apropriados, incluindo células não estimuladas e anticorpos de controle de isotipo, para diferenciar a coloração específica do fundo.
• O anticorpo é conjugado com APC, um fluoróforo brilhante adequado para painéis de citometria de fluxo multicolor. Garanta a compensação adequada quando usado com outros fluoróforos.

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