Anticorpo Monoclonal APC/Cyanine7 Anti-HLA-DRA para Citometria de Fluxo - P01903

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do HLA-DRA

• O gene HLA-DRA codifica a cadeia alfa da molécula de classe II do MHC HLA-DR, que se emparelha com a cadeia beta (HLA-DRB) para formar heterodímeros funcionais em células apresentadoras de antígenos. Este complexo apresenta peptídeos antigênicos para células T CD4+, orquestrando funções efetoras de T-helper, respostas de anticorpos e ativação de macrófagos (PubMed:15265931, PubMed:15322540, PubMed:17334368). Referências relacionadas: PMID:15265931 PMID:15322540 PMID:17334368
• Tipicamente apresenta peptídeos extracelulares de 10–30 aminoácidos derivados de antígenos endocitados e processados lisossomalmente, sendo um resíduo âncora hidrofóbico na posição 1 crítico para a ligação (PubMed:8145819). Referências relacionadas: PMID:8145819
• No microambiente tumoral, o HLA-DR apresenta peptídeos de células tumorais apoptóticas ou proteínas tumorais secretadas captadas por APCs, influenciando a imunidade anti-tumoral (PubMed:31495665). Referências relacionadas: PMID:31495665
• Além disso, o HLA-DR apresenta peptídeos de proteínas intracelulares via macroautofagia, um processo essencial para a seleção de células T no timo e manutenção da tolerância imunológica central (PubMed:17182262, PubMed:23783831). Referências relacionadas: PMID:17182262 PMID:23783831
• A localização subcelular abrange a membrana celular, membranas endossomais/lisossomais e autolisossomos, refletindo seu papel dinâmico no processamento e apresentação de antígenos.
• Expresso em células apresentadoras de antígenos profissionais (macrófagos, células dendríticas, células B) e células epiteliais tímicas (ao nível de proteína) (PubMed:15322540, PubMed:23783831, PubMed:31495665). Referências relacionadas: PMID:15322540 PMID:23783831 PMID:31495665
• A proteína apresenta uma sequência sinal N-terminal, uma única hélice transmembrana e duas ligações dissulfeto no domínio extracelular; sofre glicosilação ligada a N e pode ser ubiquitinada.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo monoclonal conjugado com APC/Cyanine7 é produzido contra HLA-DR humano recombinante; é provável que reconheça um epítopo conformacional. Para citometria de fluxo, utilize protocolos padrão de coloração de superfície em células vivas, mantendo anticorpos e células frios para evitar internalização do antígeno.
• Dada a reatividade cruzada conservada com macaco cinomolgo, considere experimentos de titulação para amostras humanas e de primatas não humanos (NHP) para determinar a concentração de trabalho ideal.
• Para minimizar a ligação inespecífica em amostras ricas em mieloides, inclua uma etapa de bloqueio de receptor Fc (por exemplo, human TruStain FcX ou similar) e controles de isotipo apropriados.
• A banda de 29 kDa (cadeia HLA-DRA) é frequentemente detectada como parte do heterodímero α/β do MHCII na superfície celular; em condições redutoras, a cadeia alfa pode migrar com um peso molecular aparente ligeiramente maior devido à glicosilação.
• Para coloração intracelular, é necessária fixação/permeabilização suave; valide o protocolo em seu sistema de amostra, pois o epítopo pode ser sensível a tratamentos agressivos.

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