Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Mouse CD45 APC/Cyanine7 para Citometria de Fluxo - P06800

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD45

• A fosfatase C de tirosina-proteína do tipo receptor (CD45), codificada pelo gene PTPRC, é uma fosfatase transmembranar essencial para a transdução de sinal em células imunes. O splicing alternativo gera múltiplas isoformas (por exemplo, CD45R, B220) com domínios extracelulares distintos.
• O CD45 é necessário para a ativação de células T através do receptor de antígeno, atuando como regulador positivo ao se ligar à DPP4. Ele modula o limiar de sinalização do receptor de células T.
• A região intracelular contém dois domínios de proteína tirosina fosfatase (PTP); o primeiro possui atividade catalítica, enquanto o segundo influencia a especificidade e a atividade do substrato.
• O CD45 desfosforila quinases da família Src como LYN, FYN e LCK, regulando assim suas atividades quinásicas e cascatas de sinalização downstream em linfócitos.
• A interação com a CLEC10A em células apresentadoras de antígeno (por exemplo, células dendríticas imaturas) ajusta finamente a ativação de células T, contribuindo para a manutenção da autotolerância.
• O CD45 está localizado na membrana celular e enriquecido em rafts de membrana e na sinapse imunológica, posicionando-o para a integração de sinais do receptor.
• As modificações pós-traducionais incluem extensiva glicosilação ligada a N e O, que influencia a expressão de isoformas e as interações proteína-proteína.
• Conhecido como antígeno comum de leucócitos (L-CA) e Ly-5, o CD45 é amplamente expresso em todas as células hematopoiéticas nucleadas, com padrões específicos de isoforma que distinguem os subconjuntos de leucócitos.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 26–566 do CD45 de camundongo, cobrindo uma grande parte do domínio extracelular. Este design provavelmente permite o reconhecimento de múltiplas isoformas de CD45, mas os usuários devem verificar a especificidade da isoforma em seu sistema.
• Para citometria de fluxo, titule o anticorpo conjugado com APC/Cyanine7 em leucócitos de camundongo para determinar a concentração ideal de coloração e inclua controles de isótipo adequados e de fluorescência menos um (FMO).
• O APC/Cyanine7 emite no canal do vermelho extremo (~780 nm), permitindo uma separação clara de fluoróforos comuns como FITC, PE e APC. Use uma linha de laser compatível (por exemplo, excitação de 633 nm) e conjuntos de filtros apropriados.
• Devido à alta expressão de CD45 em leucócitos, evite a coloração excessiva que pode causar ligação não específica; uma diluição inicial típica de 0,25–1,0 µg por milhão de células em citometria de fluxo é um ponto de referência razoável.
• Para o design do painel, considere o CD45 como um marcador pan-leucocitário para delimitar as células imunes vivas e, em seguida, combine com anticorpos específicos de linhagem (por exemplo, CD3, CD19) para a imunofenotipagem.

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