Anticorpo policlonal de coelho ASC/TMS1 para WB, IF, IHC-P, ELISA - Q9ULZ3

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ASC/TMS1

• ASC/TMS1 (proteína speck-like associada à apoptose contendo um CARD), também conhecido como PYCARD, CARD5 ou TMS-1, é uma proteína adaptadora de 22 kDa que compreende um domínio pirina N-terminal (PYD) e um domínio de recrutamento de caspase C-terminal (CARD).
• Ele atua como um scaffold central do inflamossomo, ligando sensores NLR (NLRP1, NLRP3, NLRC4) ou AIM2 à procaspase-1, promovendo assim a ativação da caspase-1, a maturação de IL-1β e IL-18 e a morte celular por piroptose. Referências relacionadas: PMID:15030775, PMID:16982856, PMID:17349957, PMID:24630722
• ASC media a apoptose promovendo a clivagem de BID dependente de caspase-8, a translocação de BAX mitocondrial e a ativação subsequente de caspase-9 e -3, geralmente independentemente de FADD. Referências relacionadas: PMID:11103777, PMID:12646168, PMID:14730312, PMID:16964285
• No núcleo, ASC pode modular a sinalização de NF-κB inibindo o complexo IKK e competindo com RIPK2, ajustando assim a expressão de genes inflamatórios. Referências relacionadas: PMID:12486103, PMID:16585594
• ASC se localiza em vários compartimentos subcelulares, incluindo citoplasma, speck do inflamossomo, retículo endoplasmático, mitocôndrias, núcleo e Golgi, o que é consistente com seus papéis versáteis na sinalização imunológica e apoptose.
• É amplamente expresso em níveis baixos, com maior abundância em leucócitos do sangue periférico, pulmão, intestino delgado, baço, timo e cólon. A expressão é frequentemente silenciada por metilação do promotor em tumores, alinhando-se com sua atividade supressora tumoral relatada. Referências relacionadas: PMID:23229815
• ASC está sujeito a modificações pós-traducionais regulatórias, incluindo ubiquitinação e fosforilação, que controlam a montagem do inflamossomo e a intensidade do sinal.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange a região central (aa 50–195) que liga os domínios PYD e CARD, o que pode conferir reatividade contra ASC de comprimento total e variantes de splicing; considere validar a especificidade por controles de knockdown ou knockout.
• No Western blot, é esperada uma banda predominante em torno de 22 kDa; use lisados de controle positivo de células THP‑1 ou células mononucleares do sangue periférico humano, e inclua inibidores de protease para minimizar a degradação.
• Para imunofluorescência e ICC, agregados do tipo speck são uma marca registrada de inflamossomos ativados; a co-coloração com anticorpos contra NLRP3, AIM2 ou caspase‑1 pode confirmar a formação do inflamossomo. As condições de fixação e permeabilização devem ser otimizadas para o tipo de célula e estado de ativação.
• No IHC‑P (tecidos embebidos em parafina), a recuperação de antígeno em tampão de citrato (pH 6,0) e o bloqueio de peroxidases endógenas são recomendados; tecidos com inflamação conhecida (por exemplo, cólon inflamado, tonsila) servem como controles positivos adequados.
• Para aplicações de ELISA, o pareamento deste anticorpo policlonal com um anticorpo monoclonal de captura pode melhorar o sinal; valide a linearidade e especificidade do ensaio com proteína ASC recombinante.
• Este anticorpo detecta ASC de humano, camundongo e rato; no entanto, a reatividade cruzada pode variar conforme o formato do ensaio, portanto é recomendado incluir validação específica por espécie.

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