Anticorpo Monoclonal Biotin Anti-CD8a para Citometria de Fluxo - P01732

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da CD8a (cadeia alfa da glicoproteína CD8 de superfície de células T)

• A CD8a é uma glicoproteína de membrana integral que atua como coreceptor para moléculas MHC de classe I em células T, permitindo o reconhecimento de antígenos peptídicos derivados de proteínas citosólicas.
• Ela interage simultaneamente com o receptor de célula T (TCR) e o MHC de classe I em células apresentadoras de antígeno, recrutando a quinase Src LCK para iniciar cascatas de sinalização que levam à ativação de células T, produção de linfocinas e citotoxicidade.
• A CD8a forma heterodímeros com CD8B em células T derivadas do timo ou homodímeros (CD8a/CD8a) em um subconjunto de células naturais killer, células T de memória, linfócitos intraepiteliais, monócitos e células dendríticas.
• A proteína está localizada na membrana celular, mas também existe uma forma secretada, provavelmente derivada de splicing alternativo.
• As principais modificações pós-traducionais incluem glicosilação, formação de pontes dissulfeto e palmitoilação, que são importantes para sua estrutura e associação com a membrana.
• A CD8a possui um domínio semelhante à imunoglobulina e faz parte do sistema imunológico adaptativo, com papéis na seleção tímica e na geração de células T CD8 de memória.
• Variantes patogênicas no gene CD8A estão associadas a imunodeficiências, destacando seu papel crítico na defesa imunológica.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O anticorpo é produzido contra a proteína recombinante correspondente ao domínio extracelular (aa 22-182) da CD8A humana, que inclui a região crítica de ligação ao MHC de classe I; recomenda-se confirmar a especificidade usando linhas celulares que expressam e que não expressam CD8a na citometria de fluxo.
• Para aplicações em citometria de fluxo, as concentrações ideais de coloração devem ser tituladas usando células primárias relevantes (ex.: PBMCs humanos ou linfócitos de macaco cynomolgo) devido à variabilidade na densidade do antígeno; um sistema de detecção biotina-estreptavidina pode amplificar a sensibilidade.
• A reatividade cruzada com o CD8a de macaco cynomolgo permite estudos translacionais, mas verifique o desempenho no seu sistema de ensaio específico, pois a conservação do epítopo pode variar.
• Como a CD8a é expressa em múltiplos subconjuntos imunológicos, as estratégias de gatamento devem incorporar marcadores adicionais (ex.: CD3, CD4) para distinguir células T citotóxicas de células NK e populações de memória.
• Para coloração intracelular, a permeabilização pode afetar a acessibilidade do epítopo; recomenda-se testar os protocolos de fixação/permeabilização com controles positivos e negativos.

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