Anticorpo Monoclonal de Coelho anti-CD45 de Camundongo Conjugado com Biotina para Citometria de Fluxo - P06800

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD45 (PTPRC)

• O CD45 (fosfatase C de proteína tirosina do tipo receptor) é um antígeno leucocitário comum (L-CA) expresso ubiquamente, também conhecido como Ly-5 e T200. O splicing alternativo gera múltiplas isoformas, incluindo B220 (CD45R), encontrado predominantemente nos linfócitos B.
• Ele contém dois domínios intracelulares de fosfatase de proteína tirosina (PTP); o primeiro domínio possui atividade enzimática, enquanto o segundo modula a especificidade pelo substrato.
• O CD45 é essencial para a ativação das células T por meio do receptor de antígeno, atuando como regulador positivo da coativação após a ligação à DPP4.
• Após a ativação das células T, o CD45 recruta e desfosforila SKAP1 e FYN, além de desfosforilar LYN para modular sua atividade quinase.
• Nas interfaces entre células apresentadoras de antígeno e células T, o CD45 interage com CLEC10A em células dendríticas imaturas, que reconhece o CD45 modificado pelo antígeno Tn nas células T efetoras, ajustando o limiar de ativação para limitar a autorreatividade.
• Ele se localiza na membrana celular, nos rafts de membrana e na sinapse imunológica, em conformidade com seu papel na transdução de sinais.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação N-ligada intensa e fosforilação em resíduos de serina/treonina.
• O CD45 é membro da família das fosfatases de proteína tirosina e pertence à classe I das PTPs do tipo receptor.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Para citometria de fluxo, titule o anticorpo biotinilado em uma faixa de concentrações (por exemplo, 0,1–5 µg/teste) para determinar o índice de coloração ideal com seu modelo celular específico e o conjugado de estreptavidina secundário.
• Inclua uma coloração de controle de isotipo apropriada para avaliar a ligação de fundo, especialmente ao utilizar sistemas de detecção amplificados, como estreptavidina-PE ou estreptavidina-APC.
• Antes do uso, valide o anticorpo na população relevante de leucócitos de camundongo (por exemplo, esplenócitos, células de linfonodos ou células mononucleares do sangue periférico) para confirmar a expressão e a resolução esperadas.
• A conjugação com biotina oferece flexibilidade; considere utilizar conjugados de estreptavidina compatíveis com os lasers e filtros do seu instrumento para painéis de uma ou várias cores.
• Para detecção indireta, garanta etapas de lavagem adequadas após a incubação primária para reduzir o anticorpo não ligado e minimizar o sinal inespecífico.

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