pAb de Coelho para CAST para WB, ELISA - P20810

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Calpastatina

• A Calpastatina (CAST) é um inibidor endógeno específico da calpaína, uma família de cisteín proteases dependentes de cálcio (EC 3.4.22.-) envolvidas na remodelação do citoesqueleto, transdução de sinal e apoptose.
• Ao se ligar firmemente e inibir a calpaína, a calpastatina regula a atividade proteásica no tecido muscular, desempenhando um papel crítico no amaciamento da carne post-mortem e possivelmente no controle da degradação de proteínas musculares em células vivas.
• O gene CAST sofre splicing alternativo extensivo, gerando múltiplas isoformas com distribuições teciduais e capacidades inibitórias distintas.
• A calpastatina contém quatro domínios inibitórios repetitivos (domínios L), cada um capaz de inibir a calpaína de forma independente, juntamente com um domínio N-terminal L e uma cauda C-terminal; essa arquitetura de múltiplas repetições é a base da sua inibição potente e cooperativa da protease.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação, fosforilação, ubiquitinação e formação de ligação isopeptídica, que podem modular a estabilidade proteica, a localização e a eficiência inibitória.
• A expressão da calpastatina é detectada em uma ampla gama de tecidos, com presença caracterizada em espermatozoides (como componente BS-17) e associação de doença com queratoderma palmoplantar.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético que abrange os aminoácidos 510–610 da CAST humana; a reatividade do anticorpo pode ser influenciada pelo uso de isoformas ou por modificações pós-traducionais nesta região.
• Para Western blot, considere otimizar a concentração do anticorpo primário (ex: 1:500–1:2000) e usar controles positivos adequados, como lisados de HeLa, HEK293 ou músculo esquelético, onde a calpastatina é expressa endogenamente.
• O anticorpo tem reatividade cruzada com camundongo e rato; verifique os padrões de bandas nessas espécies, pois os pesos moleculares podem diferir ligeiramente devido à variação de isoformas.
• Para ELISA, titule o anticorpo contra o peptídeo imunogênico ou a proteína recombinante de comprimento total para estabelecer as concentrações de trabalho; use etapas adequadas de bloqueio e lavagem para reduzir o ruído de fundo.
• Por se tratar de um anticorpo policlonal, ele pode detectar múltiplas isoformas de calpastatina; confirme a especificidade por meio de experimentos de knockdown com siRNA ou superexpressão em modelos celulares relevantes.

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